3.1.2. Phương pháp sắc ký cột nhanh (SKC nhanh)
Sử dụng cột sắc ký bằng thủy tinh dài 45 cm, tùy lượng mẫu đưa vào cột mà lựa chọn đường kính cột thích hợp. Các chi tiết kỹ thuật trong SKC nhanh đã được trình bày trong bảng 1.
Cơng việc trước tiên là nhồi cột:
Đáy cột nhồi một ít bồng, tiếp đến lớp cát mỏng nhằm tránh những hạt
silicagel có thể bị đẩy ra ngoài dưới tác dụng của áp suất. Đ ổ silicagel lên trên. Làm phăng bề mặt silicagel bằng cách vỗ nhẹ vào thành cột. Đưa hệ dung m ôi đã chọn vào cột. M ở khóa cho dung m ôi chảy ra đến khi vừa đủ thấm đều bề
mặt cột.
*
Dùng dịng khí để đuổi nhanh bọt khí ra khỏi cột. Tiếp tục cho dung m ôi và đuổi bọt khí cho đến khi thấy cột trong suốt có nghĩa là khơng cịn bọt khí nằm xen kẽ giữa các lớp silicagel trong cột.
Sau khi nhồi cột xong, cần giữ một lượng dung m ôi nằm cách bề măt silicagel khoảng 1 cm.
68
Đ ổ một lớp cát mỏng lên trỄn bể mặt silicagel để tránh việc khi 'cho dung mơi vào cột có thể gây nỂn sự xáo trộn bề mặt côt.
Mẫu được hỏa tan trong một lượng tối thiểu dung m ối chạy cột. Dùng pĩpet dua măụ vào cột. Khi mẫu đã ngấm đều qua khỏi lớp cát, cho từ từ đung môi vào cột để tránh sự xáo trộn bề mặt cột, sạu đó có thể đổ đầy dung m ối và thực hiện việc rửa giải cột cho đến khi đẩy xong toàn bộ mẫụ
Theo dõi kết qủa tách trên cột bằng SKLM, căn cứ vào kết qủa SKLM dổn các phân đoạn nhỏ có củng thành phần vào thành những phân đoạn lớn.
Cho bay hơi dung m ôi trên m áy cất quay nhằm hạn c h ế sự phân hủy mẫu bởi nhiệt độ.
Cân tổng lượng mẫu của các phân đoạn, so sánh với lượng mẫu ban đầu để biết khả nảng rửa giải của cột.
Thử độ tinh khiết của mẫu trên SKLM hoặc qua hệ thống HPLC.
3.1.3. Phương pháp sắc ký lỏng cao áp
*
Đ ể thực hiện phương pháp tách chất bàng HPLC người ta tiến hành các bước như sau: