95%.
Qúa trĩnh cụ thể của phương pháp SKC nhanh tiến hành qua những bước sau:
1. Chọn dunvi m ơi thích hợp chu sự tách và díỉy được cấu tử đến Rf = 0.35 trên bản m ỏng. trên bản m ỏng.
2. Chọn cổt cỏ đườnâ kính thích hựp (xem bảng 1). Đưa vào cột 12-15 cm
silica g el khô 40-63 //m .
32
4 -Đư;i mâu vủu CỘI, đổ đây cột bằng dung môi và rửa giải với tốc độ dòng 5 cm/phút. 5 cm/phút.
Các thông số kỹ thuạt trunti SKC nhanh được trình bày trong bảng 1.
Chất nhồi: 5cm Silicagel 60. Tốc đọ dòng: 5cm/phút. SKLM: Rf = ± 0 ,3 5 Đường kính cột [mm] Thể tích dung môi [ml] Hừm lữợng mảu [mg] Thể tích phân đoạn [ml] A R f > 0.2 A R f > 0.1 10 100 100 40 5 20 200 400 160 10 30 400 900 360 20 4 0 600 1600 600 30 50 1000 25 00 1000 50
Đ ảng 1: Các thông số kỹ thuật trong SKCnhanh
Các cấu tử tách khỏi cột, được dỗ dànu phát hiện bởi các vệt 5ỊJ.\ lấy từ mỏi phân đoạn sác ký và chấm trôn bcin mỏng dọc theo chiều dài của bản 7cm X
2 . 5c m (Hinh 2 6 ) . « n » ' ô n ằ ' ã 1 a \ 2 ĩ +■ 1 T 1 * '<i '> 'I ^CRU0E_ F R A C T I O N S SAMpLE H ình 26: Hình ánh chám ban mỏng
33
Vi viỗc ng dng phương pháp sắc ký này naười ta đã thành công trong việc tấch các hợp chất cỏ ARf' > 0 .1 5 trong thời gian chưa đến 15 phút và trong nhiổu trường hợp có thể thực hiện viộc tách ở A Rf Ä 0,10.
Lượng mâu đưạc sử dụng qua cột tỷ lộ với các thông số chỉ ra ở bảng 1. N ổng đọ mău có thơ’ tílng nếu địi hỏi sự rửa giải ít; Người ta đã sử dụng m ột cột 5 0 mm để’ làm sạch lũ g chất cố lăn tạp chất or A R f > 0.4.
Sự rửa giai được duy trì ngay cả với các cột có đường kính lớn. Ví dụ xét trường hợp epim eric ancol 145 và 146, cỏ R f = 0.34 và 0.25 trong 5% etylaxetat
(EtOAc) /ete dđu hỏa (P.E) (Hĩnh 27).
H ình 27: Epimeric ancol 145 và 146
1.0 g Hỗn hợp của 1 vủ 2 (A R f = 0.Û9) dẻ dàng được tách trong 7 phúttrên cốt đườna kính 40 mm (500 ml 5% EtOAc/P.Ẹ). trên cốt đườna kính 40 mm (500 ml 5% EtOAc/P.Ẹ).
Nếu các cấu tử cíìn tách nằm sát nhau trơn bản mỏnsì với A R f 0 .15, việc tũng sự rửa giai có thể thực hiện được khi sử dụnạ một cột dài han (khoảng 25 era) và với loại dung m ơi ít phíln cực. Loại dưng mỏi này cố thể được lựa chọn để đẩy những cấu tử có R f = 0.25 trên ban mỏng mà không cán phai tăng thời gian rửa giải m ột cách đáng kể.
Trong những trườnũ hạp khác có thể đưa vào cột lượng mâu nhỏ và giữ tốc độ rửa giải nhanh khoảng 5 em/phút. Tốc đô rửa giai chạm sẽ cho sự rửa giai kém trong hỗn hợp EtOAc/P.Ẹ.
Tóm lại SKC nhanh chứng tỏ một phương pháp nhanh và ít tốn kém trong v iệc tách điổu ch ế các hỗn hựp đỏi hỏi sự nhrgiíii trung bĩnh.
34
N gay ciì trong những trường hợp đòi hỏi sự rửa giải cao, làm sạch sơ bộ bảng kỹ Ihuíil nhanh cho phép'sự tách đưn giản mũ không cần láp đạt hệ thống cột sdc ký lỏng cao áp đát tiền.
Cdn phải nhấn mạnh ràng: viộc sử dụng silicagel 40-63 /J.m và áp suất đẩy
khí nhẹ với tốc độ dòng 5 cm / phút là những điéu chủ chốt cho việc tách có hiệu qủa của phương pháp nàỵ
Phương pháp chủ chốt đã được sử dụng để tách chất từ thành phán tan trong nước của ba cíly MTT, MTTR vủ CL chính ỉầ phương pháp SKC nhanh.
1.5.3. Phương pháp sẵe kỷ lỏng cao áp (HPLC)
Trong trường hợp cán tăng công .suất và hiệu qủa tách nhăm tách các hợp chất phán cực, các đồng phana, ß và các chất có R f xấp xỉ nhau, khơng có khả
năng tách bằng SKC ả áp suất thưònn, người ta phải áp dụng phương pháp HPLC. Hiệu suất tách chất bàng HPLC phụ thuốc vào chất nhổi cột (pha tĩnh) và dung m ôi rửa cột (pha động).
Pha tĩnh trong HPLC là các hợp chất Silicagel đã được biến tính, gắn với các g ố c hydrocacbon không phủn cực. Tùy thuộc vào đối tượng tách chất mà người ta sử dụng các loại pha tĩnh có gắn các gốc hydrocacbon khác nhaụ (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Pha tinh bao gồm các hạt chất rắn xốp, kích thước nhỏ, đường kính hạt từ 3 -1 0 /im , diện tích bẻ mặt rièng thưởng từ 50-500 m -/g [9].
Pha tĩnh íà một yếu tố quyết định sự tách của qúa trình sác ký trong cột, nó phải thỏa mãn các điều kiện sau: