Tách chất bằna phương pháp SKC cố thể áp dụng với lượng máu từ l-2 g trở lên.
29
Tuy nhiên thời gian chạy cột nít lứn vì tốc độ pha động chậm, các chất bị giữ trên cột b u có thể bị biến tính và mất chất.
Trong những năm gần đay, ứng dụng tách chất bầng phương pháp SKC nhanh đã khác phục được những nhược điểm trên, v ể nguyên tắc, phương pháp SKC nhanh cũng giống như phương pháp SKC thông thường, chỉ khác là trong qúa trình rửa giải cố sử dụng áp suất nhẹ để đíĩy nhanh các chất ra khỏi cột. Dung m ôi rửa giải chỉ thích hợp để tách nhanh một cấu tử nào đó khỏi hỗn hợp. Vì vậy nó cho phép đạt độ rửa giải nhanh, đô chụn lọc cao và tách được những mẫu có khối lượng nhỏ trong thời gian ngán.
Việc tách điều ch ế ở mức độ lớn thường tiến hành trôn những cột sác ký dàị Mặc dù các kết qủa đỏi khi có thế hài lịng song kỹ thuật này luôn mất nhiều thời gian, thường cho kết qua thu hổi thấp vì hiện tượng dùi đi (b a n d ta ilin g) trong sác ký. Vấn đế này đí)c biệt nghiẽm trọng khi phai tách các mảu lớn hom 1-
2g.
Gán đủy người ta đã ntihiên cứu cúc hộ tách điểu chế, hạ thời gian tách từ 1-3 giờ với sự rửa giải của các cấu tử có À Rf > 0,05 trên sác kỷ bản mỏng.
Trong số này đủng lưu ý ỉủ phương pháp SKC nhanh, sử dụng cột ngắn, ở phương pháp này, mậc dù sự rửa giải là trung bình ( A R f > 0.15) song hệ thống tách khổng đắt, thao tác giản đơn và cho phép tách các mãu có khối lượng 0.01 - lỌOg (đay không phiỉi là giới hạn nhưna là khoảng dao 'đôna) trong 10-15 phút (tổng thời gian kể ca việc nhồi cột, đưa màu vào cơt và hồn thành v iệc rửa giải).
SKC nhanh tiến hành ơ áp suấi trung bình (áp suất đảy khí) và sử dụng cột sác ký ngắn, đỏ Uì diều kiện tối ưu chu các hệ tách nhanh.
Các nahiôn cứu tối ưu hóa đà đưực tiến hành ở điểu kiên chuẩn, sử dụng các mău benzyl ancoi trên cột sắc ký chứa silica gel 60 (4 0 -6 3 /im ) và bộ phận phát hiện tử ngoại (T ra co l 970).
Sự rửa giải được tính bủng tỷ lệ của thời gian lưu (r) với đô rộng pic (w, w /2) (Hình 22).
30
H ình 22: Mối liên quan giữa r và w/w/2
Các kết qủa đã được trinh bày qua đổ thị trong hinh 23-25 trên cơ sở xét sự rửa giái thông qua sự biến đổi cỡ hạt silicagel, tốc độ rửa giai và hầm lượng mãụ
H ình 23: Kích thước hạt Silicagel (//m ): (•) r/w, (o) r/w/2)
0 1 0 2 0 5.0 4 0
31
I,L ,L
H ìn h 25: Hàm lượng mäu [mg]
Hàng loạt các kết qủa lý thú dã thu nhận được từ cảc số liệu này:
- Người ta nhạn thấy trong số Silicagel 60, loại thông dụng nhất 7 0 -2 3 0 m esh (6 3 -2 0 0 /Ầm) cho sự rửa giiii thấp nhíứ trong số các silicagel (thực hiện ở