C X chuẩn thêm vào
Kiểm nghiệm thuốc bằng ph−ơng pháp sinh học
4.3.2.1. Ph−ơng pháp pha chế môi tr−ờng
Khi pha chế môi tr−ờng cần tiến hành qua 6 b−ớc sau:
Chuẩn bị dụng cụ hoá chất:
Dụng cụ pha chế môi tr−ờng tốt nhất là bằng men hoặc thuỷ tinh. Các dụng cụ phải rửa sạch, hoặc tiệt trùng nóng tr−ớc khi sử dụng.
Nguyên liệu pha chế mơi tr−ờng phải đảm bảo chất l−ợng, hố chất phải tinh khiết. Nếu là các dạng bột hoặc tinh thể phải khơ, khơng đổi màu, khơng chảy n−ớc. • • • • •
Cân đong nguyên liệu:
Các nguyên liệu phải đ−ợc cân đong chính xác, nhất là những hố chất hoặc ngun tố vi l−ợng có thể gây ức chế vi khuẩn (muối mật, sắt…) phải đ−ợc cân bằng cân phân tích.
Hồ tan ngun liệu:
Th−ờng dùng n−ớc cất hoặc n−ớc khử khống để pha mơi tr−ờng. Các hố chất đ−ợc hồ tan nóng hoặc lạnh tuỳ theo tính chất của chúng. Mơi tr−ờng khơng có thạch nên hồ tan lạnh hoặc nóng nhẹ. Mơi tr−ờng có thạch cần đun cho thạch tan hồn tồn sau đó mới cho các thành phần khác vào.
Điều chỉnh pH:
Khi điều chỉnh pH của môi tr−ờng nên thực hiện ở nhiệt độ 45 - 50oC để pH ít bị thay đổi sau khi tiệt trùng. Các dung dịch NaOH 1N và HCl 1N th−ờng đ−ợc sử dụng để điều chỉnh pH. Sau khi điều chỉnh pH, cần bổ sung n−ớc cho đủ thể tích quy định.
Làm trong môi tr−ờng
Các môi tr−ờng lỏng (bao gồm các chất hoà tan) phải trong để dễ quan sát sự phát triển của vi sinh vật. Sau khi hồ tan các chất, nếu mơi tr−ờng đục cần phải lọc qua vải gạc hoặc giấy.
Đóng ống tiệt trùng:
Mơi tr−ờng đ−ợc cho vào ống nghiệm bình nón hoặc bình cầu, tuỳ theo u cầu thí nghiệm. Khi đóng ống, khơng đ−ợc để mơi tr−ờng dính vào miệng ống hoặc bình.
Mơi tr−ờng cần phải đ−ợc tiệt trùng ngay sau khi đóng gói. Nếu để lâu, tạp khuẩn sẽ phát triển làm hỏng môi tr−ờng.
Các môi tr−ờng thông th−ờng đ−ợc tiệt trùng 110oC/30 phút hoặc 120oC/ 20 phút.
Mơi tr−ờng có các chất dễ bị phá huỷ bởi nhiệt, cần tiệt trùng ở nhiệt độ thấp bằng ph−ơng pháp Tyndall, Pasteur, hoặc dùng lọc vi khuẩn. Môi tr−ờng đ−ợc lấy ra khỏi nồi hấp ngay sau khi tiệt trùng xong. Nếu để lâu trong nồi hấp môi tr−ờng bị chuyển màu và giảm chất l−ợng.
Pha chế môi tr−ờng từ hỗn hợp bột môi tr−ờng chế sẵn:
ở nhiều n−ớc trên thế giới có các loại mơi tr−ờng d−ới dạng bột khô chứa đầy đủ các thành phần theo yêu cầu, các môi tr−ờng này đ−ợc làm từ nguyên liệu, hoá chất tinh khiết nên chất l−ợng môi tr−ờng đảm bảo và ổn định. Khi làm thí nghiệm mơi tr−ờng đ−ợc pha với n−ớc theo tỷ lệ quy định, nh−ng phải
dùng n−ớc mới cất hoặc n−ớc khử khống, trung tính để pha chế. Nếu bột môi tr−ờng đã cũ cần phải kiểm tra lại pH sau khi làm môi tr−ờng.