10. Ethidium bromide, acridinedyes
3.2.2. Xử lý bã sắn thành thức ăn chăn nuôi bằng bằng công nghệ đường hóa
và lên men đồng thời
3.2.3.1.Vật liệu
Bã sắn tươi được thu gom trực tiếp từ các cơ sởchếbiến tinh bột thuộc xã Cát Quế, huyện Hoài Đức, Hà Nội. Bã sắn được chứa trong các túi nilon và giữ trong phòng lạnh (<10°C) cho đến khi sửdụng trong vòng 30 ngày.
Chếphẩm đa enzyme thơ gồm cellulase, α-amylase và glucoamylase có hoạt tính mỗi enzyme đạt 30 U/g, được sản xuất từchủng nấm sợi đột biến Aspergillus
nigerGA15 bằng phương pháp lên men xốp ở điều kiện tối ưu tại Viện Công nghệsinh học, Viện Hàn Lâm Khoa học và Công nghệViệt Nam theo quy trình ởphụlục 5.
Chế phẩm probiotic: Chế phẩm probiotic bao gồm Saccharomyces cerevisiae,Lactobacillus sp. và Bacillus sp. sửdụng trong đề tài được đóng gói dưới dạng bột, mật độ đạt 107cfu/g mỗi loại từPhòng Các chất chức năng sinh học, Viện Công nghệsinh học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệViệt Nam.
3.2.2.2. Phương pháp
a. Đường hóa bã sắn bằng enzyme
Lựa chọn nồng độenzyme thích hợp: Cân 10g bã sắntươicho vào bình tam giác 250 ml, điều chỉnh độ ẩm 30% (w/v) bằng HCl 0,01%. Bổsung chếphẩm đa enzyme thô ởcác nồng độkhác nhau (0, 2, 4, 6, 8, 10%) (theo khối lượngcơ chất). Ủ
hỗn hợp ởnhiệt độphòng, sau 24 giờtiến hành lấy mẫu xác định hàm lượng tinh bột, xơ thơ và hàm lượng đường khử. Thí nghiệm được tiến hành lặp lại 3 lần.
Lựa chọn thời gian đường hóa: Tiến hành ủ bã sắn với enzyme ởnồng độ thích hợp ở điều kiện như mô tả ở trên trong 60 giờ. Cứ sau 12 giờ ủ, mẫu được lấy để xác định lượng đường khử. Thí nghiệm được tiến hành lặp lại 3 lần.
b. Đường hóa và lên men bã sắn đồng thời tạo sản phẩm giàu protein
Xác định mức bổsung (NH4)2SO4thích hợp: Cân 10 g bã sắn cho vào bình tam giác 250 ml, điều chỉnh độ ẩm 30% bằng HCl 0,01%, bổ sung chế phẩm enzyme thô ở hàm lượng thích hợp và 0,5% chếphẩm probiotic (theo khối lượng cơ chất). Bổ sung (NH4)2SO4vào hỗn hợp lên men với hàm lượng 0; 0,5; 1; 1,5 g/100g bã sắn(tương ứng 0; 0,5; 1; 1,5 %). Tiến hành lên men ởnhiệt độ phịng. Sau 48 giờ xác định hàm lượng protein thơ, protein thực, lượng protein tăng đểxác định hàm lượng bổsung (NH4)2SO4thích hợp.
Lượng Protein tăng (Protein gain- PG) được xác định bằng công thức: PG = Pf- Po(% vật chất khô (VCK))
Trong đó: Po: Hàm lượng protein ởthời điểm bắt đầu (0 giờ) (% VCK) Pf: Hàm lượng protein sau khi lên men (48 giờ) (% VCK) Xác định thời gian tối ưu: Lên men lỏng bã sắn có bổ sung enzyme, chế phẩm probiotic (như mơ tả ở trên) cùng nitơ ởnồng độthích hợp. Lên men trong 96 giờ ởnhiệt độphòng, sau mỗi 24 giờlấy mẫu phân tích hàm lượng protein thực, xác định thời gian lên men thích hợp cho đường hóa và lên men đồng thời bã sắn. Thí nghiệm được tiến hành lặp lại 3 lần.
c. Lên men bã sắn ở điều kiện tối ưu làm thức ăn cho lợn
Cân 80kg bã sắn tươi vào thùng lên men (dung tích 120l), bổsung 400g chế phẩm probiotic (tương ứng 0,5%), chế phẩm đa enzyme và (NH4)2SO4 với hàm lượng thích hợp, trộn đều, điều chỉnh về độ ẩm 30% bằng nước máy. Đặt các bình lên men ởtrong phịng kín. Sau thời gian lên men thích hợp, tiến hành lấy mẫu xác định thành phần dinh dưỡng (protein thô, protein thực, tinh bột, xơ thơ, lipit thơ, khống tổng số, axit hữu cơ tổng số, HCN), pH và chất lượng cảm quan.
d. Phương pháp phân tích
Phương pháp lấy mẫu phân tích theo TCVN 4325:2007 Xác định hàmlượng vật chất khơ theo TCVN 4326:2007.
Định lượng khống tổng số(tro thơ) theo TCVN 4327:2007. Định lượng xơ thô theo TCVN 4329: 2007.
Xác định hàm lượng lipit thô theo TCVN 4321:2007. Định lượng canxi theo TCVN 1526: 2001.
Định lượng protein thơ được tính tốn trên cơ sở xác định hàm lượng nitơ tổng sốbằng phương pháp Kjeldahl theo TCVN 4328:2007.
Phương pháp xác định hàm lượng Protein thực: Nghiền nhỏ mẫu, hịa với nước cất trong bình tam giác, đun cách thủy trong 30 phút. Đểnguội, kết tủa protein bằng axit tricloaxetic. Tách kết tủa, rửa sạchvà định lượng nitơ theo phương pháp của Kjeldahl.
Phương pháp xác định hàm lượng tinh bột: Tinh bột được thủy phân thành đường trong dung dịch HCl 10% ở điều kiện đun sơi trong bình cách thủy trong 90 phút. Dung dịch thủy phân được làm nguội và trung hòa bằng NaOH với chỉthị methyl da cam. Hàm lượng đường sau khi thủy phân được xác định bằng phương pháp DNS theo mô tảcủa Miller (1959).
Đường khử được xác định theo phương pháp DNS được đềxuất bởi Miller (Miller, 1959).
pH được đo bằng máy đo pH đểbàn của hãng Mettler Toledo, Trung Quốc. HCN và aflatoxin được gửi phân tích tại viện Vệsinh và an toàn thực phẩm Quốc gia.