CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.3.4.đánh giá ảnh hưởng thời gian lây nhiễm ựến khả năng biểu hiện gen gus của GS
của GS012
Trong thắ nghiệm này, chúng tôi thử nghiệm thời gian lây nhiễm giữa vi khuẩn và mẫu ựến khả năng nhận gen gus của mẫu. Thời gian lây nhiễm cũng là một trong nhân tố có ảnh hưởng lớn ựến khả năng xâm nhập và chuyển gen của vi khuẩn.
Sử dụng mẫu mô trục phôi làm ựắch ựể chuyển gen. Sử dụng vi khuẩn LB 303 với OD = 0,6 ựã ựược tối ưu ở các thắ nghiệm trên và cho vi khuẩn lây nhiễm bằng cách tiếp xúc trực tiếp là ngâm mẫu trong dung dịch vi khuẩn LB 303 theo các thời gian là 15, 30, 45, và 60 phút. Sau ựó ựồng nuôi cấy trên môi trường ựồng nuôi cấy 3 ngày rồi nhuộm X-gluc ở 370C trong 24h.
Quan sát mẫu ựã ựược xử lý với dung dịch X-gluc, thấy rằng mẫu có màu xanh chàm ựặc trưng, chứng tỏ có là sự biểu hiện tạm thời của gen gus trong mẫu.
Kết quả của thử nghiệm thời gian biến nạp ảnh hưởng ựến hiệu suất chuyển gen gus:
Bảng 3.6. Ảnh hưởng thời gian lây nhiễm ựến khả năng biểu hiện gen gus của giống GS012
Thời gian Số mẫu lây nhiễm Tỉ lệ mẫu thâm ựen (%) Tần suất chuyển gen (%) Mức ựộ biểu hiện 15 phút 186 6,45 3,76 + 30 phút 203 12,81 5,42 + 45 phút 195 18,97 5,64 ++ 60 phút 181 19,89 8,84 ++
Ghi chú: + Xanh ựậm quan sát rõ ++ Xanh nhạt
3Biểu ựồ 3.3. Ảnh hưởng thời gian lây nhiễm ựến khả năng biểu hiện gen gus của giống GS012
Quan sát kết quả (bảng 3.6 và biểu ựồ 3.3), thấy rằng:
Khi thời gian lây nhiễm với khuẩn càng lâu thì sức sống mẫu càng giảm 93,18-80,17% tuy nhiên ở thời gian 60 phút tỉ lệ mẫu sống vẫn trên 80 %. đồng thời thời gian càng tăng thì tần suất chuyển gen càng lớn cao nhất ở 60 phút với tần suất chuyển 8,84%. Nhưng nếu lây nhiễm mẫu với khuẩn quá lâu thì làm tổn thương mẫu và khó rửa khuẩn và khả năng mẫu tái sinh sau chuyển gen là kém do vậy thời gian biến nạp thắch hợp nhất với chủng LB 303 giống ựậu cove GS012 là 60 phút.