CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1.3. Vật liệu nghiên cứu
2.1.3.1. Vật liệu thực vật
Bốn giống ựậu cove ựược trồng phổ biến ở miền Bắc - Việt Nam kắ hiệu PV- 1, PV-2, PV-3, PV-4. Cả 4 giống ựược sử dụng cho nghiên cứu tỷ lệ nảy mầm và khả năng biểu hiện gen gus. Giống PV-2 ựược sử dụng cho nghiên cứu quy trình tái sinh và chuyển gen mang cấu trúc amiRNA ức chế biểu hiện gene V type H+ Ờ ATPase của một số loài sâu hại.
PV-1 PV-2 PV-3 PV-4
Hình 2.1. Các giống ựậu cove
PV: Phaseolus vulgaris
PV-1: BEA-01 do công ty TNHH Sản Xuất Thương Mại Xanh phân phối PV-2: GS02 do công ty Bio-Green Tech. International phân phối
PV-3: AYOKA do công ty TNHH Việt Nông phân phối
PV-4: CONTENDER do công ty TNHH Sản Xuất Thương Mại Xanh phân phối.
2.1.3.2. Các chủng Agrobacterium tumefaciens và plasmid
- Vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens chủng LB 303 chứa cấu trúc mang gen intron-beta-glucuronidase (gus) (plasmid pBin19, hình 2.2).
Hình 2.2. Plasmid pBin 19
- Vi khuẩn A.tumefaciens chủng LBA 4404 mang cấu trúc miRNA V- ATPase nhân tạo (plasmid pPS1 tái tổ hợp, hình 2.3). A. tumefaciens chủng LBA 4404 mang Ti-plasmid AL 4404. Hệ genome của vi khuẩn có chứa gen kháng rifampicin. Ti-plasmid chứa gen kháng streptomycin.
- Sơ ựồ cấu trúc gen miRNA V-ATPase nhân tạo: 5Ỗ- TCAAACTCTTTGAATTGCCTT-3Ỗ
- Vector pPS1 có kắch thước là 12544 bp mang gen kháng kanamycin- nptII
Chú thắch:
- T-DNA left border: Bờ trái, T-DNA right border: Bờ phải
- NptII Gene: Gene kháng Kanamycin
- P 35Sx2e: cauliflower mosaic virus (CaMV) 35S promoters kép
- TEV 5Ỗ UTR: Yếu tố tăng cường dịch mã của Tobacco etch virus (TEV) - VspB 3Ỗ: soybean vspB 3Ỗ UTR và polyadenylation signal
