CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2.3.đánh giá ảnh hưởng của mật ựộ quang của dịch khuẩn (OD) ựến khả năng biểu hiện gen gus ở giống GS
Mật ựộ quang của dịch khuẩn (OD) là nhân tố quan trọng ảnh hưởng ựến tỷ lệ sống và tần số chuyển gen của mẫu. Nếu như mật ựộ vi khuẩn quá thấp dẫn ựến xác suất xâm nhập vào chuyển gen và hệ gen thực vật thấp, nếu mật ựộ vi khuẩn quá cao thường sẽ gây chết tế bào thực vật giảm khả năng tái sinh của các tế bào sau
khi biến nạp, dẫn tới giảm tần số chuyển gen bền vững. Vì vậy, trong thắ nghiệm này chúng tôi tiến hành thử nghiệm với các OD khác nhau là 0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1 của chủng vi khuẩn Agrobacterium tumerfaciens LB 303. đồng nuôi cấy mẫu mô trục phôi ựược lây nhiễm khuẩn trên môi trường ựồng nuôi cấy trong 3 ngày. Kết quả thu ựược như ở bảng 3.5 và biểu ựồ 3.2
Bảng 3.5. Ảnh hưởng của mật ựộ quang của dịch khuẩn (OD) ựến khả năng biểu hiện gen gus của GS012
OD Số mẫu lây nhiễm Mẫu bị thâm ựen (%) Tần suất chuyển gen (%) Mức ựộ biểu hiện 0 198 3,95 0 0,2 175 13,71 2,86 + 0.,4 161 18,02 4,97 + 0,6 183 20,22 9,29 ++ 0,8 206 24,76 10,19 ++ 1 192 40,10 9,38 + Ghi chú: + Xanh nhạt ++ Xanh ựậm, quan sát rõ
Biểu ựồ 3.2. Ảnh hưởng của mật ựộ quang của dịch khuẩn (OD) ựến khả năng biểu hiện gen gus của giống GS012
Nhìn vào bảng 3.5 và biểu ựồ 3.2 thấy rằng: Mật ựộ quang của dịch khuẩn (OD) ảnh hưởng rõ rệt ựến tần số chuyển gen cũng như tỷ lệ sống của mẫu. Khi theo dõi thắ nghiệm chúng tôi thấy OD quá thấp dẫn ựến tần số biến nạp thấp do lượng khuẩn không ựủ, còn nếu OD quá cao sẽ gây chết mẫu mà trong khi tần số biến nạp không cao.
- Ở OD = 0,2 -0,4 tỷ lệ sống của mẫu là rất cao ( >80%), tuy nhiên tần số chuyển gen gus vào mẫu thấp chỉ từ 2,86- 4,97%.
- Ở OD= 0,6- 0,8 chúng tôi thấy rằng: tỷ lệ sống của mẫu cao (> 75%) và có tần số chuyển gen lớn, lần lượt tương ứng là 9,29 % và 10,19% .
- Tỷ lệ sống và tần số chuyển gen bắt ựầu giảm mạnh từ OD = 1 Với tỷ lệ sống là 59,9% và tần số chuyển gen tương ứng là 9,38%.
Như vậy, OD thắch hợp nhất cho quá trình chuyển gen ựậu cove GS012 là dao ựộng trong từ 0,6-0,8. Ở trong khoảng OD này, chúng tôi thu ựược tỷ lệ sống >75% và tần số chuyển gen của mẫu 9,29% - 10,19%