Đông khô là một phương pháp phổ biến trong bảo quản protein. Các mẫu G- CSF sau khi đông khô sẽ được kiểm tra hoạt tính nhằm xem xét ảnh hưởng của chất trợ đông đến kết quả thử nghiệm sinh học và hoạt tính protein sau quá trình đông
G-CSF chuẩn Mẫu G Mẫu H ED50(pg/ml) 174,1 140,8 205,8 LU(units/mg) 5,74.106 7,10.106 4,86.106
Trang 59
Kết quả và Biện luận Luận văn Thạc sĩ Sinh học
khô. Đây là cơ sở giúp cho việc đánh giá và điều chỉnh quá trình đông khô hiệu quả hơn.
Các mẫu G-CSF kiểm tra hoạt tính là những mẫu được đông khô sử dụng hai loại chất trợ đông:
- Mẫu I: Chất trợ đông là glycerol. - Mẫu K: Chất trợ đông là maltose.
Sau khi kiểm tra hoạt tính hai mẫu trên bằng quy trình định tính, chúng tôi tiến hành quy trình định lượng nhằm xác định đơn vị hoạt tính của mẫu thông qua phân tích đường cong tương quan giữa logarit nồng độ mẫu thử và mức độ tăng trưởng tế bào cũng như giá trị ED50 bằng phần mềm GraphPad Prism 5.0.
-4 -2 0 2 4 6 8 0.5 1.0 1.5 2.0 Leukocim I K Log[G-CSF] ( OD 4 50 - OD 5 95 )
Hình 3.13. Đường cong tương quan giữa mức độ tăng sinh tế bào với nồng độ mẫu G-CSF chuẩn và mẫu đông khô
Dựa vào đồ thị, chúng tôi nhận thấy ở tất cả các mẫu, đường cong đều có dạng chuẩn của một thử nghiệm tăng sinh và đoạn tuyến tính của các đường cong gần sát nhau. Điều này cho thấy hai loại chất trợ đông có trong các mẫu không ảnh hưởng đến kết quả thử nghiệm sinh học, đồng thời các mẫu này có cùng dạng tác động sinh học lên dòng tế bào M-NFS-60 như mẫu chuẩn. Do đó, chúng tôi có thể tính đơn vị hoạt tính IU của mẫu đông khô trên dựa vào giá trị IU mẫu Leukocim.
Trang 60
Kết quả và Biện luận Luận văn Thạc sĩ Sinh học
Bảng 3.7. Kết quả tính LU và IU mẫu G-CSF chuẩn và mẫu đông khô
G-CSF chuẩn Mẫu I Mẫu K ED50(pg/ml) 210,5 232,7 251,0 LU(units/mg) 4,75.106 4,30.106 3,98.106
IU(units/mg) 108 0,91.108 0,84.108
Kết quả xác định đơn vị hoạt tính cho thấy mẫu sau đông khô vẫn giữ được hoạt tính cao chứng tỏ quá trình đông khô có hiệu quả.
Như vậy, quy trình thử nghiệm sinh học có thể áp dụng để xác định đơn vị hoạt tính của mẫu protein đông khô.
Từ các kết quả trên, chúng tôi kết luận quy trình thử nghiệm hoạt tính sinh
học G-CSF tái tổ hợp in vitro được xây dựng có thể áp dụng đối với các loại mẫu
khác nhau của các khâu trong quy trình sản xuất.