Áp dụng quy trình thử nghiệm sinh học đối với các mẫu protein sau tinh chế nhằm kiểm tra hoạt tính của mẫu đồng thời xác định hiệu quả quá trình tinh chế. Mẫu sau tinh chế cần phải đạt kết quả hoạt tính sinh học cao biểu hiện qua dạng đường cong tương quan song song, gần sát với đường cong mẫu G-CSF chuẩn và các giá trị LU, IU cao.
Các mẫu protein dùng cho thử nghiệm hoạt tính được tinh chế theo 2 hướng: - Mẫu G: Tinh chế ion dung ly bằng pH chứa Tris HCl.
- Mẫu H: Tinh chế ion dung ly bằng muối NaCl.
Các mẫu protein G, H sau khi được chứng minh là có hoạt tính bằng quy trình định tính sẽ tiếp tục được định lượng. Gá trị ED50 của mẫu được xác định từ đường cong tương quan giữa logarit nồng độ mẫu thử và mức độ tăng trưởng tế bào xây dựng nhờ phần mềm GraphPad Prism 5.0.
Trang 58
Kết quả và Biện luận Luận văn Thạc sĩ Sinh học
-4 -2 0 2 4 6 8 0.5 1.0 1.5 Leukocim G H Log[G-CSF] ( OD 4 50 - OD 595 )
Hình 3.12. Đường cong tương quan giữa mức độ tăng sinh tế bào và nồng độ mẫu G-CSF chuẩn và nồng độ mẫu sau tinh chế
Nhận thấy ở các mẫu thử nghiệm đều cho kết quả dạng đường cong chuẩn của thử nghiệm tăng sinh đồng thời đoạn tuyến tính của các đường cong gần như song song và trùng nhau, do đó dạng tác động của mẫu thử và mẫu chuẩn lên tế bào MNFS-60 là giống nhau nên chúng tôi có thể suy ra giá trị IU mẫu kiểm tra từ IU
mẫu Leukocim (Bảng 3.6).
Bảng 3.6. Kết quả tính LU và IU mẫu G-CSF chuẩn và mẫu sau tinh chế
Từ kết quả giá trị IU của các mẫu sau tinh chế, chúng tôi nhận thấy các mẫu này đều có hoạt tính cao, chứng tỏ quy trình tinh chế đạt hiệu quả.