- ELIS A, PCR
9. Salmonella (Trực khuẩn đường ruột) 1 Đặc tính sinh vật học
9.1 Đặc tính sinh vật học
Salmonella là một chi vi khuẩn lớn thuộc họ trực khuẩn đường ruột. Đây là những vi khuẩn hìmh que nhỏ (0,4 - 0,6), hai đầu trịn, Gram âm, đa số có lơng roi (tiêm mao) (-Sal. Gallinarum , Sal. Pullorum) và đều là chu mao khuẩn và khơng hình thành nha bào (bào tử).( tương tự như E.coli)
Chúng phát triển tốt trên môi trường thạch thường, ở 35 - 37 °C, sau 20 - 24 giờ hình thành khuẩn lạc trịn từ trong suốt khơng màu đến hơi đục, hơi lồi hoặc có dạng giọt sương, bóng láng. Để ni cấy phân lập thường dùng môi trường tuyển lựa như thạch MacConkey, SS, EMB,... hoặc là sau khi nuôi cấy bồi dưỡng
52
trong môi trường 50% dịch mật (bị, lợn,...) rồi dùng mơi trường tuyển lựa để nuôi cấy khởi đầu để phân lập.
Salmonella có phản ứng indol âm tính, MR âm tính, VP âm tính, sử dụng citrate dương tính, hồn ngun nitrate dương tính, di động, lysine decarboxylase dương tính, adonit âm tính, lên men mannit, thường khơng lên men lactose, saccharose trừ một số ngoại lệ dạng huyết thanh học, dạng sinh học nhất định. Hàm lượng C+G (mol%) là 50 -53.
9.2 Chẩn đoán vi khuẩn học
Nuôi cấy trên môi trường chọn lọc BGA : Khuẩn lạc màu trắng môi trường màu đỏ. Thạch máu: không dung huyết. MCK: khuẩn lạc không màu.
53
Hình 8.2: khuẩn lạc Salmonella trên MCK
TSI: K/A : đỏ/vàng, gas H2S: dương, IMVIC: -+-+
Để kiểm tra phản ứng oxidase ta lấy khuẩn lạc quệt (bằng góc phiến kính hay tăm tre hay tăm gỗ, khơng dùng que cấy kim loại vì có thể cho phản ứng dương tính giả) lên giấy thấm đặt trên một phiến kính rồi làm ướt giấy đó bằng thuốc thử oxidase chế bằng cách hòa 10 mg diethyl- (hoặc tetramethyl-) p -phenylenediamin HCl vào 1 ml nước cất (tránh ánh sáng, có thể cất được 2 - 3 ngày). Có thể nhỏ từng giọt thuốc thử này lên khuẩn lạc trong đĩa Petri hoặc tẩm thuốc thử vào giấy thấm, sấy khơ trong khơng khí ở chỗ tối, đậy kín, khi dùng thì bơi khuẩn lạc lên rồi làm ướt giấy. Các trực khuẩn đường ruột có phản ứng oxidase âm tính: khuẩn lạc khơng chuyển sang màu tím đen trong vịng 10 giây.
9.3 Chẩn đốn huyết thanh học
Thơng thường, để chẩn đốn bệnh phó thƣơng hàn gà ngoài việc phân lập và đồng định vi khuẩn bệnh nguyên, người ta còn thường dùng các phản ứng ngưng kết để phát
54
hiện gà mắc bệnh hoặc mang trùng làm nguồn bệnh lây lan. Trong đó, phản ứng ngƣng kết nhanh trên phiến kính với giọt máu nguyên là phương pháp phổ biến, tiện lợi, ơn giản có thể thực hiện ngay tại cơ sở sản xuất, và khá chính xác. Kháng nguyên chuẩn được sử dụng là các chủng Salmonella Gallinarum- Pullorum có cấu tạo kháng nguyên đầy đủ (Salmonella I, IX, XII , XII :-.-) và được nhuộm bằng crystal violet (hoặc Gentian violet). Dùng ống hút nhỏ 2 - 3 giọt kháng nguyên lên bề mặt vùng (ô đánh dấu) định trước trên một tấm kính sạch (hoặc tấm gạch men sạch), dùng que cấy (có khun cấy đường kính 2 - 3 mm) lấy một khuyên máu nguyên hòa đều vào kháng nguyên, đọc kết quả sau khoảng 45 giây. Phản ứng dương tính cho hiện tượng ngưng kết tức các tế bào vi khuẩn kết cụm lại tương phản với nền trong suốt màu hồng nhạt, thấy được bằng mắt thường. Trong trường hợp âm tính, hỗn dịch kháng nguyên - máu ngun Khơng đổi tức có màu đồng nhất. Chú ý rằng đánh giá kết quả phản ứng chỉ trong vòng 2 phút, và mỗi lần chỉ nên làm 4 mẫu để tránh hiện vùng viền trông như ngưng kết do giọt kháng ngun bị khơ
9.4 Phịng trị (kết hợp với E.coli)