- ELIS A, PCR
58Hình 11.1: nhuộm Ziehl Neelsen
Hình 11.1: nhuộm Ziehl Neelsen
Mycobacterium là những vi khuẩn hiếu khí, có phản ứng catalase khơng ổn định, oxidase âm tính, phân giải glucose bằng phương thức lên men. So với các vi khuẩn khác thì tế bào vi khuẩn kháng acid hàm lượng lipid lớn hơn nhiều. Trong số đó chủ yếu là các chất sáp, chứa nhiều là acid mycolic và liên quan đến tính kháng toan của tế bào vi khuẩn. M. tuberculosis có khả năng phát triển trên môi trường nuôi cấy đơn giản nhưng glycerin (là chất chống mất nước môi trường). Trên bề mặt mơi trường lỏng hình thành màng mỏng chứa nhiền vi khuẩn. Dịch lọc từ canh khuẩn của 2 vi khuẩn này đều chứa nhiều protein, uberculin là sản phẩm cô đặc từ dịch lọc đó được sử dụng để chẩn đốn bệnh lao.
11.2 Chẩn đoán vi khuẩn học: phân lập
Ngồi ra cịn có phương pháp nhuộm Ziehl Neelsen cho vi khuẩn lao: Sau
khi cố định, tiêu bản được nhuộm bằng dung dịch hemotoxilin hơi đậm hơn bình thường trong khoảng 10 - 20 phút, rồi phủ dung dịch Ziehl ở 600C trong khoảng 30 phút đến 1 giờ, rửa nhẹ bằng nước, rồi tẩy màu bằng ethanol pha 1% HCl cho đến khi tiêu bản có màu hồng nhạt (màu đào), giữ tiêu bản trong dung dịch loãng litium phenolate cho đến khi màu tím của hemotoxilin xuất hiện, rửa nhẹ bằng nước, loại nước bằng cồn, cố định bằng xylol rồi hiển vi. Vi khuẩn kháng acid nhuộm màu đỏ.
Nuôi trên môi trường: Lowenstein (20-30 ngày): khuẩn lạc khô, nhăn nheo (người); thưa, khơ (bị); ướt nhẵn, tráng xám (gà)
59
Môi trường này được chế bằng cách hòa 2,4 g KH2 PO4 , 0,24 g MgSO4.7H2 O, 0,6 g magnesium citrate, 3,6 g asparagine và 12 ml glycerin tinh chế vào 600 ml nước cất, đun nóng và lắc cho tan đều, thêm 30 g tinh bột khoai tây, trộn đều và đun cho đến khi dịch trở nên trong suốt thì hạ nhiệt xuống 56 °C, thêm 1 lít dịch trứng toàn phần và 20 ml malachite green 2% rồi rót vào các ống nghiệm để ống nghiêng và xử lý nhiệt 85 °C trong 40 phút để đến ngày tiếp theo lại xử lý nhiệt ở 30 °C trong vòng 40 phút để có mơi trường nghiêng
11.3 Chẩn đoán huyết thanh học: phản ứng dị ứng
Khuẩn lao tố: tuberculin ( OT- old tuberculin) - PPD (Purified protein derivative) M, A. Cách dùng: tiêm dưới da: đo nhiệt độ, nhỏ mắt : viêm sau 2-3 ngày, Tiêm nội bì: bị: 1/3 trước vai; heo:gốc tai; gà: rìa tích chỗ dày nhất; sau 72 giờ: đo dộ dày da (≥3,6 mm; >2,6mm; < 2,6mm)
11.4 Phịng trị Bị Bị
Khơng dùng vaccin. Các biện pháp thực hiện đối với trại chăn ni trâu bị.Bảo vệ các đàn thú khỏe: Kiểm tra thường xuyên các thú đang nuôi trong đàn.Mỗi năm hoặc mỗi 2, 3, 4 năm, mọi thú (từ 6 tuần tuổi trở lên) được thử phản ứng lao tố. Nếu khơng có phản ứng dương tính sau 2 lần thử liên tiếp cách nhau 6 tháng-1 năm, cơ sở đó sẽ được cơng nhận là khơng nhiễm. Kiểm tra thú mới đưa vào đàn:Sau khi đưa vào, trong vòng 15 ngày phải kiểm tra với tuberculin. Nếu phản ứng dương tính thú phải được đánh dấu và loại ra.
Lồi khác
Vaccine phịng bệnh do vi khuẩn Mycobacterium tuberculosis: Vaccine BCG và Vaccine MVA85A (Một loại vắc-xin mới có tác dụng ngừa bệnh lao do ĐH Oxford
60
bào chế và đang thử nghiệm lâm sàng tại Nam Phi. Loại vắc-xin này rất an tồn và kích thích phản ứng miễn dịch ở mức độ cao
chú ý: Cho đến nay việc sử dụng vắc-xin để phòng bệnh lao vẫn chưa gọi là phương
pháp tối ưu. Chẳng hạn như vắc-xin BCG vẫn chưa hiệu quả đối với các loại bệnh lao chỉ có thể giúp phịng ngừa một số dạng bệnh lao nguy hiểm nhưng đối với lao phổi thì khơng hiệu quả. Đối với vắc-xin MVA85A thì vẫn chưa thể sử dụng rộng rãi được vì chưa đảm bảo được hiệu quả thực tiễn. Tuy nhiên, việc tiêm vắc-xin cũng rất cần thiết để phòng ngừa và hạn chế bệnh trong trường hợp những cách điều trị khác khơng được hiệu nghiệm( Vì dùng thuốc kháng lao đầu tiên có hiệu lực đến 99% nhưng hiệu lực đã bị giảm đáng kể do lờn thuốc lao).