- ELIS A, PCR
1. ASPERGILLUS FUMIGATUS (nấm mốc)
Đây là chi cùng với chi Penicillum là các chi nấm phổ biến nhất, luôn phân lập được từ thực phẩm và đất đai ở các vùng địa lý khác nhau trên thế giới với tần suất rất cao. Chi này bao gồm hơn 150 loài khác nhau nhưng, trong số đó, chỉ có lồi Aspergillus fumigatus là nấm bệnh nguyên quan trọng.
1.1 Đặc tính hình thái
Đặc trưng của các nấm chi này là từ khuẩn ty phát triển kéo dài thành cuống bào tử bính (conidiophore: "phân sinh tử bính"), trên đầu của hình thành túi đỉnh (vesicle: "đỉnh nang"), còn ở vùng gốc hình thành tế bào chân (foot cell: "túc tế bào). Đầu của cuống bào tử đính thường được gọi là đầu bào tử đính (conidial head) có hình thái đặc trưng lồi. Khuẩn lạc A. fumigatus có màu xanh dương nhạt hoặc màu lục. Cuống bào tử bính trơn nhẵn, khơng màu. Đầu bào tử đính có dạng hình trụ đặc. Nấm phát dục ở 45 °C.
1.2 Đặc tính ni cấy
Phương pháp tiêu bản ni cấy trên phiến kính (slide culture mount) khá đơn giản. Nhỏ vài giọt môi trường thạch (Sabourraud,...) lên giữa tâm phiến kính đã khử dầu và sát trùng. Chú ý nếu q nóng, lớp mơi trường sẽ quá mỏng, vậy nên cần làm nguội đến vừa độ. Dùng một lá kính mỏng nhúng cồn và đốt nóng rồi đặt lên khối thạch trên phiến kính để làm phẳng mặt thạch. Lấy bỏ lá kính. Cấy một lượng rất nhỏ nấm từ khuẩn lạc thuần khiết vào trung tâm mặt khối thạch. Đặt phiến kính vào đĩa Petri đã khử trùng có nắp kín khít trong đó đã đặt sẵn giá làm từ đũa thủy tinh và ít ml nước đã khử trùng để duy trì độ ẩm. Đậy nắp đĩa và ni dưỡng nấm ở trạng thái đó
65
Nuôi cấy trên môi trường thạch Czapek-Dox (Czapek-Dox solution agar) được chế bằng cách hòa 3 g glucose, 0,2 g NaNO , 0,1 g K2 HPO4, 0,05 g MgSO4.7H2O, 0,05 g KCl, 0,001 g FeSO4 .7H2O và 1,5 g agar vào 100 ml nước, đun nóng cho tan
đều, chỉnh PH đến 6,8, rót ống, khử trùng 15 phút ở 121 °C.
1.3 Tính gây bệnh
Nấm này gây bệnh viêm phổi do aspergillus (aspergillary pneumonia, còn gọi bệnh aspergillus phổi xâm lấn - invasive pulmonary aspergillosis) ở các loài chim như gà, chim cánh cụt,... Trong trường hợp cấp tính, khuẩn ty phát triển dạng phân nhánh chạc hai bên trong phổi. Nếu bệnh trở nên mãn tính, ổ bệnh thường giới hạn, hình thành ổ bệnh dạng u thịt. Ở bị, nấm A. fumigatus có thể là nguyên nhân gây bệnh viêm buồng vú hoặc sẩy thai.
Nấm gây bệnh bề mặt phổ biến là các nấm thuộc nhóm nấm da (dermophytes). Bên cạnh nhóm này cịn có một số nấm khác thuộc nhóm phân loại riêng biệt, cũng hình thành bệnh tích ở da
1.4 Chẩn đốn
1.4.1 Phương pháp chẩn đốn
Phương pháp tiêu bản ni cấy trên phiến kính (slide culture mount)
Phương pháp nhuộm PAS (periodic acid - Schiff's stain) thường dùng để nhuộm polysaccharide như glycogen, mucin, acid hyaluronic, reticulin, fibrin, hyalin
1.4.2 Phương pháp thực hiện
Để quan sát nấm da trong bệnh phẩm người ta thường dùng bệnh phẩm là lơng hoặc vảy vùng có bệnh biến. Thông thường để làm mềm và sáng tiêu bản, sau khi đặt bệnh phẩm lên phiến kính người ta nhỏ lên một vài giọt dung dịch NaOH 20% hoặc KOH 20%, để tủ ấm 15 - 20 phút hoặc hơ nhẹ trên ngọn lửa cho đến khi xung quanh bệnh phẩm xuất hiện bọt trắng, tránh hơ nóng quá làm bào tử ở gốc lông rụng rời ra. Sau đó, nhỏ vài giọt glycerin lên tiêu bản, đậy lá kính rồi hiển vi. Cũng có thể làm sáng tiêu bản mà tránh làm thay đổi vị trí của khuẩn ty trong và xung quanh sợi lông bằng dung dịch chloral lactophenol (2 phần chloralhydrate, 1 phần acid lactic, 1 phần phenol).
Để nhuộm nấm da trước hết phải tẩy mỡ tiêu bản bằng chloroform rồi cho formol tác động 2 - 3 phút, đun sôi, rửa bằng nước cất rồi nhuộm bằng dung dịch xanh
66
cotton trong lactophenol (dung dịch lactophenol cotton blue: được chế bằng cách hòa 20 g phenol tinh thể, 20 g acid lactic và 40 g glycerin vào 20 ml nước cất, đun nóng nhẹ cho tan đều rồi thêm 0,05 g thuốc nhuộm cotton blue, thuốc nhuộm này có tác dụng cố định tiêu bản) hoặc xanh cotton soudan III trong lactophenol (100 ml lactophenol bão hòa trong soudan III, 0,5 g cotton blue). Quan sát dưới kính hiển vi có thể thấy các sợi nấm (khuẩn ty) và bào tử ở trong hoặc ở ngồi sợi lơng động vật bệnh. Sợi nấm thường có đường kính 2 - 6 μm, dài 15 - 50 μm phân nhánh nhiều hoặc ít. Bào tử có nguồn gốc từ những sợi nấm này, phân bố thành chuỗi hoặc thành đám tùy lồi nấm.
1.5. Phịng trị
1.5.1 Biện pháp phịng nấm
Khơng ăn lúa thức ăn ôi thiu và ăn thức ăn đã nhiễm nấm hay bào tử nấm…
1.5.2 Biện pháp trị nấm
Thường dùng các thuốc uống như ketoconazol, itraconazol voriconazol , ngồi ra có thể dùng amphotericin B điều trị bệnh nấm hệ thống. Tại chỗ tuỳ trường hợp có thể bơi kem, mỡ có chứa dẫn chất imidazol.