1. Khái niệm
Kháng thể đơn dòng là kháng thể chỉ có một lớp Ig do một "clon" lympho bào sản xuất ra để chống lại một quyết định kháng ngun (epitop) riêng biệt nào đó.
Ví dụ: Lớp IgA. Bình thường khi một kháng nguyên vào cơ thể sẽ gây ra đáp ứng miễn dịch đa clon, trong đó kháng thể dịch thể gồm nhiều lớp: IgM, IgG,... các kháng thể này chống lại với nhiều epitop.
Kháng thể đơn dịng, giống nhau hồn tồn về cấu trúc, paratop, mức độ đặc hiệu. Kháng thể đơn dịngkhơng có trong điều kiện tự nhiên. Con người đã phải nghiên cứu và sản xuất ra trong phịng thí nghiệm, đây là đóng góp lớn cho miễn dịch học về nghiên cứu, ứng dụng trong chẩn đoán và điều trị. Milstein và Kohler đưa ra phương pháp sản xuất kháng thể đơn dòng vào năm 1975 bằng kỹ thuật liên hợp tế bào Myeloma (tế bào u tủy) với lympho bào B hoạt hoá của chuột.
2. Phương pháp sản xuất kháng thể đơn dịng ngồi cơ thể
Để sản xuất kháng thể đơn dòng, người ta dùng kỹ thuật lai tế bào để kết hợp hai loại tế bào: Tế bào u tuỷ (tế bào Myeloma) với lympho bàoB đã hoạt hoá của chuột để tạo tế bào lai, tế bào lai ni trong mơi trường nhân tạo có khả năng phân chia phát triển lâu dài và sản xuất kháng thể đặc hiệu.
Nguyên tắc:
- Tế bào u tuỷ được nuôi cấy trong môi trường nhân tạo HAT (Hypoxanthin Aminopterin Thymidin) có khả năng sinh sản nhanh chóng. Trong khi đó một số tế bào u tuỷ khơng có enzym HPRT (Hypoxanthin Phospho Ribosyl Transfezaza có vai trị xúc tác tổng hợp được Guanin một bazơ tham gia tổng hợp ADN từ Hypoxanthin) nên khơng tổng hợp được ADN do đó tế bào u tuỷ này không sinh sản được và sẽ chết.
- Lympho bào B khơng có khả năng sinh sản trong mơi trường nhân tạo vì nó là tế bào sau cùng của sự biệt hố. Nhưng nó có Enzym HPRT, khi ni trong mơi trường HAT có khả năng tổng hợp được Guanintừ Hypoxanthin nên ADN được tổng hợp.
- Khi trộn tế bào u tuỷ khơng có Enzym HPRT với lympho bào B lấy từ lách, máu ngoại vi của một cơ thể được miễn dịch với sự có mặt của Polyethylenglycol (PEG). PEG có tác dụng làm thay đổi màng tế bào để 2 tế bào kếthợp với nhau. Sau đó ni cấy hỗn hợp lai 2 loại tế bào này trong mơi trường HAT. Có 3 trường hợp xảy ra:
+ Liên hợp lai giữa tế bào u tuỷ với tế bào u tuỷ, do khơng có enzim HPRT vì thế tế bào bị chết. + Liên hợp lai giữalympho bào B với lympho bào B tủy có men HPRT nhưng cũng bị chết sau vài ngày vì khơng phân chia và phát triển mãi trong in vitro.
+ Liên hợp lai giữa tế bào u tuỷ với lympho bào B sẽ sống trong môi trường nhân tạo và có khả năng sản sinh, phát triển mãi mãi trong môi trường nhân tạo và tạo ra các "clon" tế bào tiết kháng thể đặc hiệu. Vì nó một mặt tiếp thu khả năng sinh sản của tế bào u tuỷ, một mặt nó tiếp thu đượcenzim HPRT của lympho bào B.
- Nếu lympho đưa vào lai đã xử lý kháng nguyên gọi là lympho hoạt hoá (thường là lympho bào B hoạt hố) thì liên hợp lai sẽ phân chia, phát triển và sản xuất kháng thể đặc hiệu tương ứng với kháng nguyên đã biết.
-Sau bước liên hợp tạo ra các tế bào lai người ta pha loãng dần để tách riêng từng tế bào lai. Mỗi tế bào lai được nuôi riêng, chúng phân chia, phát triển thành một "clon" riêng biệt và sản xuất kháng thể chống lại một quyết định kháng nguyên (epitop), từ đó ta thu được khángthể đơn dịng.
Người ta ni dịng "clon" này trong môi trường nhân tạo hoặc có thể ni trong phúc mạc của động vật cùng loài với tế bào lai (chuột) rồi thu lấy dịch trong phúc mạc trong đó có lượng kháng thể đơn dòng cao. Hiện nay người ta đã lai được tế bào u tuỷ của chuột nhắt với lympho bào B hoạt hoá của chuột nhắt.
Hình 5.10 Sơ đồ sản xuất kháng thể đơn dòng trên chuột (Nguyễn Bá Hiên, 2009)
Câu hỏi ơn tập
1. Trình bày khái niệm và cấu trúc của kháng thể dịch thể đặc hiệu? 2. Đặc tính và chức năng của kháng thể dịch thể đặc hiệu?
3. Trình bày quy luật hình thành kháng thể dịch thể đặc hiệu và các yếu tố ảnh hưởng đến sự hình thành kháng thể dịch thể đặc hiệu?
CHƯƠNG 6
LYMPHO BÀO T -ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH QUA TRUNG GIAN TẾBÀO QUA TRUNG GIAN TẾBÀO
Đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào (ĐƯMDTB) là phương thức bảo vệthứhai bên cạnh đáp ứng miễn dịch dịch thểnhằm loại trừKN lạcó hại khi nó xuất hiện trong cơ thể. Gọi là ĐƯMDTB vì người ta nhận thấy muốn gây miễn dịch thụ động phải dùng hỗn dịch tếbào mà không thểdùng kháng huyết thanh (Ig).
Trong quá trình tiến hóa của sinh vật, ĐƯMDTB có trước và nó chi phối hoạt động (điều hịa) của miễn dịch dịch thể.
Hình 6.1 Miễn dịch dịch thể và miễn dịch qua trung gian tế bào (http://www.benhhoc.com/)