II. CÁC PHẢN ỨNG HUYẾT THANH HỌC THƯỜNG DÙNG TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH
b. Kỹ thuật tiến hành
Kỹthuật đơn giản trong môi trường lỏng
KN và KT đều được sửlýởdạng dung dịch (lỏng) Kỹthuật phản ứng trong môi trường thạch
Trong ống nghiệm (kỹthuật Oudin): chia làm 2 loại
+ Khuếch tán đơn: thạch đã trộn sẵn KT (hoặc KN) rồi cho vào ống nghiệm trước, sau đó cho phần cịn lại vào. Sau một thời gian, xem có sựkhuếch tán từphía trên vào trong thạch tạo thành kết tủa (có vạch màu trắng).
+ Khuếch tán kép: cho KT vào trước, rồi cho vào trên KT một lớp thạch bình thường (khơng chứa KN và KT). Sau đó cho lên trên mặt thạch dung dịch KN hoà tan (hoặc làm ngược lại). Trong trường hợp này KN và KT sẽkhuếch tán ngược chiều nhau, gặp nhau tại một nơi nào đótrong thạch, kết hợp bão hịa và kết tủa.
Trên phiến kính hoặc trên đĩa petri ( kỹthuật Ouchterlony)
Hình 11.5 Phản ứng kết tủa trên thạch (Ian R. Tizard, 2004) 3. Phản ứng trung hòa (Neutralization test)
Nguyên lý: phản ứng trung hòa là phản ứng huyết thanh học gián tiếp dựa trên tác động trung hòa KN bằng huyết thanh miễn dịch đặc hiệu. Phản ứng được sử dụng chủ yếu để xác định các mầm bệnh phân lập được (đặc biệt là virus) hoặc định lượng hàm lượng huyết thanh miễn dịch trong cơthểsinh vật cần chẩn đoán.
Người ta đánh giá phản ứng trung hịa thơng qua việc thử nghiệm hoặc chuẩn độ lượng huyết thanh miễn dịch có trung hồ được KN hay khơng ? Việc đánh giá này phải thông qua gián tiếp trên động vật thí nghiệm, trên phơi gà hay trên tế bào ni cấy. Ngồi việc thử nghiệm để xác định mầm bệnh phân lập được, trong thực tế phản ứng trung hịa cịn được sử dụng để chẩn đốn bệnh (chẩn đoán bệnh dịch tả bằng phản ứng trung hịa trên thỏ), đểthử độan tồn của vaccin (chuẩn độ vaccin).
Để đánh giá kết quảcủa phản ứng người ta thường chuẩn độ để xác định liều gây chết 50% động vật thí nghiệm - liều LD50 (Lethal Dose 50%), liều trên phôi gà là LDE 50% (Lethal Dose Embryo 50%) hoặc liều trên tếbào nuôi cấy CPE 50%(Cyto-Pathogenic Effect 50%). Khi tiến hành phản ứng cần phải cho KN và KT có đủ thời gian tác động và phải bố trí phản ứng đối chứng.