II. CÁC PHẢN ỨNG HUYẾT THANH HỌC THƯỜNG DÙNG TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH
b. Phản ứng miễn dịch đánh dấu enzym (ELISA Enzym Linked Immunosorbent Assay)
Đây là một trong những phương pháp quan trọng được ứng dụng rộng rãi trong chẩn đoán thú y.
Phản ứng ELISA gián tiếp tìm kháng thể
Nguyên lý: Các giếng của khay nhựa được phủ sẵn kháng nguyên. Kháng nguyên phải được gắn chặt vào khay nhựa sao cho sau khi rửa phải còn một lớp kháng nguyên phủ trong các giếng. Nhỏ huyết thanh (cần kiểm tra) vào các giếng, nếu trong huyết thanh có kháng thể đặc hiệu thì kháng thể sẽ kết hợp với kháng nguyên được pha sẵn trong giếng. Sau khi ủ và rửa để loại bỏ kháng thể không gắn với kháng nguyên, kháng thể đã kết hợp với kháng nguyên được phát hiện bởi kháng thể đã được gắn enzyme, nhỏ cơ chất của enzyme làm đổi màu thành phần phản ứng. Độ đậm của màu sắc tỷ lệ với lượng kháng thể gắn enzyme được gắn với kháng thể có trong giếng, tức là tỷ lệ thuận với lượng kháng thể có trong huyết thanh. Kết quả của phản ứng được xác định bằng mắt thườnghoặcbằng máy đo quang phổ.
Hình 11.7 Mơ hình phản ứngELISA gián tiếp (Nguyễn Bá Hiên, 2009)
Phản ứng ELISA trực tiếp tìm kháng ngun
Hình 11.8 Mơ phỏng phản ứng ELISA trực tiếp
Cố định kháng thể đặc hiệu vào các giếng của khay nhựa, rửa nước để loại bỏ kháng thể khơng gắn. Sau đó cho huyết thanh hoặc huyễn dịch bệnh phẩm (nghi có chứa kháng nguyên) đã chiết xuất thành dung dịch vào. Nếu có kháng nguyên tương ứng chúng sẽ gắn với kháng thể
đặchiệu. Rửa nước để loại bỏ các thành phần thừa.
Tiếp tục cho kháng kháng thể đã gắn enzym vào. Kháng kháng thể sẽ gắn với kháng nguyên trong phức hợp kháng nguyên-kháng thể ở bước trên. Rửa nước để loại bỏ các thành phần thừa của phản ứng.
Sau khi cho cơ chất của enzym vào, nếu có xuấthiện màu tức là có kháng nguyên tương ứng với kháng thể đặc hiệu, phản ứng dương tính.
Nếu không xuất hiện màu, tức là khơng có kháng ngun tương ứng với kháng thể nên khơng có kết hợp kháng ngun - kháng thể và kháng nguyên và kháng - kháng thể bị rửatrôi. Phản ứng âm tính.
Phản ứng này tạo ra tập hợp kháng thể-kháng nguyên-kháng thể nên còn được gọi là phản ứng ELISA. Phản ứng này được sử dụng rộng rãi, đặc biệt trong trường hợp lượng kháng nguyên q ít khơng đủ để phát hiện bằng phương pháp trực tiếp.