Tiến hành làm tiêu bản vết phết âm đạo: dùng ống hút bằng cao su mềm chứa sẵn một giọt nước cho vào âm đạo chuột, bơm vào và hút ra nhiều lần, cuối cùng hút lấy chất nhờn và trải lên lame [15]. Để lame khô ở nhiệt độ phòng, cố định tiêu bản bằng methanol trong 5-10 giây. Nhuộm tiêu bản bằng thuốc nhuộm Giemsa (1:20 trong dung dịch đệm Giemsa) trong khoảng 30 phút. Rửa tiêu bản qua dòng nước chảy, để khô và quan sát dưới kính hiển vi [5].
Bảng 2.2: Thành phần tế bào và tính chất của chất nhờn âm đạo ở các giai đoạn động dục [5] Thời kỳ Thành phần tế bào Tính chất của chất nhờn âm đạo Bạch cầu (Leucocyte) Tế bào sừng (Cornified cell ) Tế bào bì mô có nhân (Epithelial cell) Proestrus (P) - - ++++ Nhờn, trong Estrus (E) - ++++ - Lỏng, đục Metestrus (M) ++ ++ ++ Nhờn, trong Diestrus (D) ++++ - + Đặc sệt, trong
(-) Không có, (+) lượng tế bào ít, (++) lượng tế bào vừa phải, (++++) lượng tế bào nhiều
Quan sát tiêu bản bằng vật kính x10 và x40 để quan sát các thành phần của tiêu bản. Đánh giá kết quả như sau [15]:
- Giai đoạn tiền động dục (Proestrus): tế bào bì mô có nhân (nucleated epithelial cell) chiếm ưu thế, xuất hiện theo từng cụm hoặc rời rạc. Thỉnh thoảng có một số tế bào sừng (cornified cell) hiện diện trong mẫu.
- Giai đoạn động dục (Estrus): xuất hiện nhiều tế bào sừng hóa theo từng cụm. Tế bào không có nhân, bào tương có hạt và hình dạng tế bào bất thường.
- Giai đoạn gián cách động dục (Metestrus): giai đoạn này hiện diện hỗn hợp các loại tế bào trong đó bạch cầu (leucocyte) chiếm ưu thế, chỉ có một vài tế bào bì mô có nhân và/hoặc tế bào sừng hiện diện.
- Giai đoạn nghỉ ngơi (Diestrus): giai đoạn này gồm chủ yếu là bạch cầu và rải rác các tế bào bì mô.
Tính toán kết quả [5]
Tính tỷ lệ % thú vật trong lô cho phản ứng dương tính theo công thức:
Trong đó:
% Động dục S 100
n m
S: số lần xuất hiện thời kỳ Estrus và Proestrus trong toàn lô n: số súc vật trong lô
m: số lần lấy chất nhờn