Do tác dụng kiểu estrogen mang bản chất phức tạp nên đến nay vẫn chưa có một thử nghiệm đơn lẻ nào có thể bao hàm tất cả phạm vi của nó. Thay vào đó, người ta sử dụng một vài thử nghiệm in vitro và in vivo để đánh giá hoạt tính estrogen của các hợp chất.
Những thử nghiệm gắn ER in vitro cung cấp thông tin về khả năng của các phytoestrogen trong việc tương tác với các ER, gắn với ERE (estrogen responsive element) trên promoter của gene mục tiêu sau khi tạo phức hợp ligand-ER và tương tác giữa các tác nhân đồng hoạt hóa (co-activator) và các ER theo kiểu phụ thuộc ligand. Ngoài ra, các thử nghiệm chuyển hoạt hóa (transactivation) trên tế bào giúp dò tìm sự kích hoạt gene thông qua ER. Những phân tích sinh hóa in vitro có thể được sử dụng để kiểm tra tác động khả dĩ trên hoạt động của protein. Thử nghiệm E- screen dùng để đo lường đáp ứng tăng sinh hoặc kháng tăng sinh trên những tế bào đáp ứng với estrogen.
Tuy nhiên, để đánh giá hoạt tính estrogen trên mô hoặc cơ quan phải cần đến phương pháp in vivo. Ở động vật cái, thử nghiệm bổ tử cung (uterotrophic assay) có
tính ứng dụng khi cần khảo sát tính đồng vận hay đối vận đối với ERα của hợp chất thử nghiệm trên đối tượng động vật trưởng thành giảm năng sinh dục hoặc động vật non. Ngoài ra, hoạt tính estrogen trên tuyến vú có thể được khảo sát thông qua sự kéo dài ống tuyến và thay đổi cấu tạo của núm vú ở những động vật non hoặc gần dậy thì. Ở con đực, thử nghiệm Hershberger trên chuột cống gần dậy thì-thiến có thể được sử dụng để kiểm tra đáp ứng (anti)androgen hoặc (anti)estrogen trên những tuyến sinh dục thứ cấp và các mô khác được điều hòa bởi hormone. Bên cạnh những thử nghiệm ngắn hạn này, các thử nghiệm độc tính đối với sinh sản (reproductive toxicity) mạn tính và cận cấp tính cũng như các nghiên cứu hai thế hệ có thể được sử dụng cho phytoestrogen để xác nhận tính an toàn khi sử dụng dài hạn [46].
Ngoài ra, một vài nghiên cứu trên phytoestrogen còn sử dụng phương pháp khảo sát chu kỳ động dục cũng như sự mở âm đạo sớm ở chuột non [31].
CHƯƠNG 2. VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP