Nghiên cứu độc tính cấp của mẫu thử trên động vật thí nghiệm, chủ yếu là xác định liều chết trung bình nếu có (liều làm chết 50% số con vật thí nghiệm = LD50 lethal dose 50%) trong những điều kiện nhất định. Biết LD50 mới xác định được chỉ số điều trị TI là một thông số rất quan trọng để quyết định liều điều trị, thường là khoảng 1/10 LD50 hoặc nhỏ hơn. Chỉ số điều trị TI (therapeutic index) là
tỉ số giữa liều chết trung bình LD50 và liều hữu hiệu trung bình ED50: TI =
LD50
ED50
Điều kiện: TI ≥ 10 [3]
Cho chuột uống các loại cao ở liều tối đa mà thuốc có thể bơm qua kim (với thể tích 0,2 ml/10 g thể trọng) [1]. Cao thuốc được đưa vào dạ dày chuột bằng một kim cong đầu tù qua đường miệng. Theo dõi và ghi nhận tình trạng chuột và số chuột chết trong vòng 72 giờ. Có 3 trường hợp xảy ra [3], [7]:
Trường hợp 1: nếu cho chuột uống cao thuốc mà không có con nào chết thì ta
tìm được liều cao nhất bơm qua kim mà không làm chết chuột, được ký hiệu là Dmax và liều tương đối an toàn Ds dùng cho thực nghiệm dược lý là 1/5 Dmax hoặc lớn hơn.
Trường hợp 2: nếu cho chuột uống mà tỉ lệ chết là 100% thì đây là liều chết
tuyệt đối (LD100). Ta tiếp tục tìm liều tối đa mà không có con vật nào chết, gọi là liều dưới liều chết (infralethal dose) và được ký hiệu là LD0. Sau đó suy ra liều LD50. LD50 được tính theo phương pháp Karber-Behrens.
Trường hợp 3: nếu đã thử đến liều có động vật thí nghiệm chết, nhưng không
có liều nào đạt mức độ chết 100%. Khi đó tuy không xác định được LD50, nhưng vẫn xác định được liều LD0. Liều tương đối an toàn Ds dùng cho thực nghiệm dược lý được lấy giá trị bằng 1/5 - 1/10 LD0.
Sau khi tìm được các liều thử nghiệm, tiến hành khảo sát 2 tác dụng: (1) tác dụng kiểu estrogen trên các đối tượng: chuột cái non, chuột cái bình thường trưởng thành và chuột giảm năng sinh dục; (2) tác dụng giảm đường huyết trên chuột giảm năng sinh dục-tiêm streptozotocin.