a. Mục đích
Khảo sát nhằm khẳng định lại chủng vi khuẩn là chủng lactic và tính thuần khiết của chúng, từ đó tiến hành định danh cấp lồi.
Chủng LAB L5
Tăng sinh trong MRS broth 370C, 24h
Cấy chuyền sang MRS agar 370C, 48h
Khảo sát đặc điểm sinh lý, sinh hóa
Giải trình tự gen 16S rRNA
Định danh cấp lồi
Quan sát hình thái khuẩn lạc
- Nhuộm Gram
- Thử nghiệm catalase - Thử nghiệm khả năng
b. Thuyết minh quy trình
Chủng LAB L5 được hoạt hóa và tăng sinh trong MRS broth đã được hấp khử trùng ở 1210C trong 15 phút, đem ủ ở 370C trong 24h. Sau đó, tiến hành cấy chuyền sang MRS agar, ủ ở 370C trong 48h. Tiến hành quan sát hình thái khuẩn lạc và khảo sát các đặc điểm sinh lý sinh hóa của chủng vi khuẩn bằng các phương pháp:
- Nhuộm Gram;
- Thử nghiệm catalase;
- Thử nghiệm khả năng lên men đường.
Sau khi đã khẳng định chủng LAB và tính thuần khiết, chủng vi khuẩn được gửi đi để tiến hành định danh cấp lồi bởi cơng ty Nam Khoa Biotek.
2.3.2.2. Khảo sát môi trường ni cấy thích hợp nhất thay thế MRS
Mơi trường được lựa chọn để khảo sát thay thế cho MRS là môi trường Sữa gầy (SG) với các nồng độ glucose khác nhau (SG0, SG3, SG7) (mục 1.5, phụ lục 1).
Các thí nghiệm so sánh các chỉ tiêu giữa mơi trường MRS với các môi trường SG0, SG3, SG7 được thực hiện đồng thời với mật độ cấy giống ban đầu (106 cfu/ml), điều kiện và thời gian nuôi cấy như nhau. Các chỉ tiêu so sánh gồm: khả năng kháng nấm in vitro, khả năng thu sinh khối, khả năng sinh acid và khả năng phân giải protein.
a. Thí nghiệm 1: Khảo sát khả năng thu sinh khối
Thí nghiệm thực hiện theo quy trình hình 2.3. Xây dựng đường chuẩn tế bào trên môi trường MRS và môi trường SG. Chủng L5 sau tăng sinh 24h trong môi trường MRS và SG, được đo OD 600 nm và trải đĩa trên MRS agar đồng thời từ một huyền phù vi khuẩn, ủ 370C trong 48h, tiến hành đếm khuẩn lạc. Đường chuẩn là đồ thị biểu diễn OD 600 nm phụ thuộc vào mật độ vi khuẩn cfu/ml.