Mẫu sau khi lấy xong, nếu khơng phân tích ngay, cho vào ngăn đá tủ lạnh bảo quản mẫu. Chú ý mẫu phải được phân tích trong vòng 24h từ khi lấy.
2.2.2. Chuẩn bị mẫu
Rã đơng trước khi phân tích, rã ở nhiệt đợ phòng.
Cân mẫu:các dụng cụ lấy mẫu cân, đựng mẫu phân tích và nơi cân cần đảm bảo vơ trùng. Lượng mẫu cần cân tùy theo loại vi sinh cần phân tích.
43
2.2.3. Phương pháp
Định tính Salmonella bằng phương pháp trải đĩa và test sinh hóa. Đây là phương pháp dùng để định tính và kết luận phát hiện hay khơng phát hiện Salmonella trong mợt lượng mẫu xác định.
Cấy mẫu vào mơi trường tăng sinh chọn lọc RV, phân lập trên mơi trường XLD và khẳng định bằng các mơi trường thử nghiệm sinh hoá (mơi trường TSI, Ure Broth, lên men Mannitol, LDC both, thử nghiệm Indol, thử nghiệm Voges- Proskauer).
44
2.2.4. Qui trình thu thập mẫu và tiến hành kiểm nghiệm Salmonella
Hình 2.1. Qui trình thu thập mẫu và tiến hành kiểm nghiệm Salmonella.
Sản phẩm thủy sản
Thu tại các chợ và siêu thị
Đánh giá các chỉ tiêu
Cảm quan Vi sinh
Test Salmonella
45
2.2.5. Qui trình phân tích
Hình 2.2. Qui trình phân tích phát hiện Salmonella
Cấy 0,1ml dung dịch tăng sinh sang mơi trường tăng sinh chọn lọc (RV), ủ ở 42oC, 18 - 24 giờ.
Phân lập khuẩn lạc đơn trên ít nhất 2 mơi trường chọn lọc phân biệt (XLD,HE,BS,SS...),ủ ở 37oC, 24 giờ.
Chọn các khuẩn lạc đặc trưng cho Salmonella, cấy sang BHI hay TSA, ủ qua đêm.
Thử nghiệm sinh hóa cho kết quả:
- Trên KIA/TSI: đỏ/vàng, có/khơng H2S, sinh hơi/khơng.
- Urea:(-), indol: (-), VP: (-), LDC: (+), ODC: (+), Manitol: (+), Sobitol: (+).
Thử nghiệm ngưng kết kháng nguyên huyết thanh: Poly: O, Poly: H.
Kết luận: Salmonella dương tính/ âm tính trong 25g mẫu.
Đờng nhất 25g mẫu trong 225ml mơi trường tăng sinh (BPW), ủ ở 37oC, 18 - 24 giờ.
46
2.2.5.1 Thuyết minh qui trình a) Chuẩn bị mẫu a) Chuẩn bị mẫu
Dùng kéo vơ khuẩn cắt 25g mẫu (khơng lấy mỡ, lấy cả chất lỏng nếu cĩ), cho vào bao nylon vơ khuẩn. Thêm vào 225ml mơi trường PBW đã hấp khử trùng để nguợi. Tiến hành đờng nhất mẫu được đợ pha lỗng 10-1. Đem ủ ở nhiệt đợ 37oC trong 24 giờ.