CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3 Phương pháp phân tích
2.3.2 Phương pháp phân tích chỉ tiêu vi sinh
2.3.2.1. Đếm trực tiếp số lượng tế bào [73]
Nguyên tắc
Dùng pipet lấy 1 giọt mẫu cần xác định cho vào khe hở giữa buồng đếm hồng cầu và lá kính. Đếm sốlượng tế bào nấm men dưới kính hiển vi.
Thiết bị
– Kính hiển vi.
– Buồng đếm hồng cầu. Tiến hành
– Pha lỗng mẫu bằng nước vơ trùng sao cho khi quan sát ở mỗi ơ vng lớn có khơng q 200 tế bào.
– Dùng pipet lấy 1 giọt mẫu cho vào khe hở giữ buồng đếm và lá kính. – Chỉnh kính hiển vi, độphóng đại 400 lần để thấy rõ được 1 ô lớn gồm 16 ô vuông nhỏ (nếu dùng buồn đếm Thomas). Đếm tất cả số tế bào có trong ơ quan sát.
– Đểđảm bảo độ chính xác của kết quả, đếm lặp lại như vậy trên ít nhất 5 ơ lớn.
Kết quả
45
𝐹𝐹 =𝑛𝑛 × 𝑓𝑓𝑣𝑣
Trong đó: N: mật độ tế bào của mẫu, tế bào/mL.
n: số tế bào trung bình có trong 1 ơ vng lớn.
v: thể tích 1 ơ vng lớn, mL.
f: hệ số pha loãng mẫu.
2.3.2.2. Xác định số tế bào sống hay chết trong mẫu [73]
Các tế bào sống chứa các enzym có khảnăng chuyển xanh metylen thành
chất không màu. Khi ngâm tế bào vào dung dịch xanh metylen thì chất này đi qua
màng tế bào và các enzym của tế bào sống làm mất màu xanh. Các tế bào chết thì
các enzym khơng cịn hoạt động nên không thể làm mất màu xanh metylen, do đó
các tế bào này bị nhuộm xanh.
Do đó, đểxác định số tế bào sống và chết trong mẫu, tiến hành trộn đều dung dịch xanh metylen 0,01% với mẫu (1 giọt mẫu và 1 giọt dung dịch xanh metylen)
trước khi đếm sốlượng tếbào như ở phương pháp Đếm trực tiếp số lượng tế bào
(2.3.2.1).
Số lượng tế bào sống (chết) được tính theo % so với tổng lượng tế bào có trong mẫu.