2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.3.6. Phƣơng pháp thử tác dụng của chế phẩm trên chuột thí
Xác định liều chế phẩm thử nghiệm cho chuột:
Để đảm bảo nồng đô ̣ tác du ̣ng của thuốc và đa ̣t được kết quả tối ưu nhất , trong thí nghiê ̣m này chúng tôi dựa vào kết quả đô ̣c tính cấp thu được từ hoa ̣t chất ASP (tiền chất ta ̣o ch ế phẩm sinh học) đã thử nghiê ̣m ở giai đoa ̣n 1 tại Phòng Thử nghiệm Sinh học, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn Lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam thử nghiệm. Liều thử nghiê ̣m trên chuô ̣t được cho ̣n tương đương 1/7 của liều thử đô ̣c tính cấp 27,5mg không gây độc cho chuột.Mỗi lần chuột uống 0,2ml dung dịch và đạt đủ nồng độ cần thiết: 1/7 x 27,5= 3,930 (mg/kg TLCT).Chuột nhắt trắng Mus musculus sử dụng trong thí nghiệm có TLCT trung
bình là 20g/con. Như vậy liều cho chuột uống là 0,0786mg/0,2ml/con/lần. Cho
chuột uống 20 lần trong 25 ngày. Tổng lượng chế phẩm thử nghiệm cho một chuột là: 0,0786 x 20 = 1,572mg.
Với thuốc làm đối chứng dương 6-MP (Hình 2.13), liều cho chuột uống được chọn là 1/10 LD50.6-MP cịn có các tên khác là Purinethol, Mercaptopurine … 6-
MP được tổng hợp và phát triển bởi Hitching, Elion tại Phịng thí nghiệm Wellcome Research và có định danh quốc tế là 1,7-dihydro-6H-thione monohydrate.Thuốc này được sử dụng để điều trị nhiều loại ung thư, trong đó đặc trị ung thư mơ liên kết như ung thư máu, các khối u lympho không phải Hodgkin, chứng tăng hồng cầu, viêm khớp vẩy nến và bệnh viêm ruột. 6-MP ức chế quá trình tổng hợp và trao đổi các nucleotide thuộc nhóm purin, làm biến đổi sự tổng hợp và chức năng của ADN và ARN.Thuốc cũng cản trở quá trình chuyển đổi giữa các nucleotide và quá trình tổng hợp glycoprotein.Các thử nghiệm cho thấy khi uống 6-MP thì có một số phản ứng phụ như buồn nôn, biếng ăn, tiêu chảy. Liều gây chết 50% động vật thí nghiệm của 6-MP là LD50= 480mg/kg trọng lượng cơ thể chuột nhắt khi uống qua đường tiêu hóa[3]. Như vậy, mỗi lần chuột uống 0,2 ml dung dịch chứa nồng độ 6-MP là 48mg/kg TLCT. Chuột thí nghiệm có trọng lượng trung bình 20g nên liều 6-MP cho chuột uống là 0,96mg/0,2ml/con/lần với tổng lượng chế phẩm thử nghiệm cho một chuột là 19,2mg.
Hình 2.12: Thuốc 6MP (Purinethol hay Mercaptopurine)
Xác định sự tăng trọng lƣợng của chuột trong q trình thí nghiệm:
Khi bắt đầu q trình thí nghiệm chuột được cân trọng lượng từng con bằng cân điện tử, tiến hành phân lơ sao cho trọng lượng trung bình của chuột trong mỗi lô là tương đương nhau. Tiến hành cân 4 ngày/lần để xác đ ịnh lại trọng lượng của chuột ở các lơ trong suốt q trình thí nghiệm.
Tiến hành phân lô như sau:
Bảng 2.8: Lô và các thơng số trong q trình thí nghiệm
LƠ LƢỢNG SỐ NGÀY UỐNG LIỀU UỐNG T.GIAN UỐNG
ĐCSH 5 Không thử nghiệm 0
ĐCUT+DM 10 7,8,9,10,11,13,14,15,
16,17,19,20.21,22,23,25,26,27,28,29
0,2ml dung môi
pha thuốc (H2O) 25 ngày
UT+6MP 10 7,8,9,10,11,13,14,15, 16,17,19,20.21,22,23,25,26,27,28,29 0,96mg/0,2ml/lần /con 25 ngày UT+CPSH 10 7,8,9,10,11,13,14,15, 16,17,19,20.21,22,23,25,26,27,28,29 0,0786mg/0,2ml/ lần/con 25 ngày Chuột mang u được thử nghiệm bắt đầu điều trị vào ngày thứ 7 sau cấy ghép, uống liên tục 5 ngày nghỉ 1 ngày trong vòng 25 ngày.