2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.3.7. Các phƣơng pháp đánh giá tác dụng khán gu của chế phẩm
Dựa vào kết quả gây tạo mơ hình u rắn thực nghiệm trên ba dòng tế bào Sarcoma 180 và kết quả xác định khả năng gây độc (IC50) trên dòng tế bào này của chế phẩm, chúng tôi tiến hành nghiên c ứu khả năng ức chế khối u của chế phẩm trên mơ hình chuột nhắt trắng Swiss Mus musculus mang u rắn Sarcoma-180 thực
Chuột nhắt trắng Swiss Mus musculus giống đực, có trọng lượng trung bình 20g, sau khi được cấy ghép tế bào ung thư mô liên kết Sarcoma-180 dưới da ở vùng ngực (lệch về phía bên trái chuột) để tạo u rắn.
Các lô chuột được chia và thử nghiệm với liều lượng như đã nêu trên. Phương thức tác động thuốc là bằng đường uống, sơng thực quản, dùng sơranh (có kim cho uống cong, dài, đầu tù) đưa thuốc sâu vào trong cổ họng chuột, để tránh hiện tượng chuột nhè thuốc ra ngồi.
Chuột được theo dõi, đo kích thước u, vẽ đường cong tăng trưởng khối u và so sánh quá trình phát triển u giữa lô đối chứng và các lô thử nghiệm chế phẩm (thời gian theo dõi là 32 ngày kể từ ngày cấy truyền u).
Đo nhật kích thước khối u 3 ngày/lần để theo dõi sự thay đổi kích thước khối u rắn (từ ngày thứ 7 sau khi cấy truyền u, ngày bắt đầu thử nghiệm ): đo đường kính nhỏ nhất (a), đường kính lớn nhất (b) bằng thước đo hình 2.13, sau đó tính thể tích khối u rắn theo công thức:
V= 0,4.a.b2 (1)
Trong đó: a: đường kính nhỏ nhất của khối cầu (mm) b: đường kính lớn nhất của khối (mm) V: thể tích khối u (mm3)
Hình 2.13: Thƣớc kẹp caliper Xác định tỷ số phát triển và tỷ số ức chế khối u (%) Xác định tỷ số phát triển và tỷ số ức chế khối u (%)
Sau 25 ngày th ử nghiệm với CPSH và là ngày thứ 32 sau cấy ghép u, tiến hành đo u thu kích thước của từng cá thể chuột sau điều trị.
- Tỷ số phát triển GR% của chế phẩm được tính theo cơng thức:
GR%= TN/ĐC x 100%
Trong đó: TN: Kích thước trung bình u ở lơ thí nghiệm ĐC: Kích thước trung bình u ở lơ đối chứng - Tỷ số ức chế IR% được tính theo cơng thức:
IR % = 100% - GR%
So sánh tỷ số này với thang đánh giá hiệu lực kháng u của H. Itokawa để xác định hiệu quả của chế phẩm (Bảng 2.9).
Bảng2.9: Thang đánh giá hiệu lực kháng u của H. Itokawa
Tỷ số phát triển u GR% Hiệu lực kháng u IR%
70-100% 0
41 – 70% +
11 – 40% ++
0 – 10% +++
Xác định các chỉ tiêu sinh hóa máu ngoại vi
Sau đơ ̣t thử nghiê ̣m m ỗi lơ ch ̣t thí nghi ệm được lấy mẫu máu của một số cá thể bằng cách cắt động mạch cổ.Mẫu máu được xác định các chỉ tiêu huyết học bằng máy phân tích tự động Swelab Alpha, tại Viện Quân Y 103. Các chỉ tiêu được so sánh với kết quả nghiên cứu về các chỉ tiêu sinh hóa máu ngoại vi chuột của nhóm tác giả Dzieciolowska EW [6].
Chƣơng 3 – KẾT QUẢ