10µg/ml (A), 20µg/ml (B) và 40µg/ml (C), sau 24h, màu đỏ
Đối với dòng tế bào MCF7, nồng độ CPSH ở 40 µg/ml đã gây chết tế bào mạnh khiến cho tế bào bong khỏi bề mặt nuôi cấy gần 90% nên số lượng tế bào cịn lại rất ít và không phản ánh đúng trạng thái quần thể. Ở nồng độ 20µg/ml, MCF7 cũng chịu tác động mạnh nên tỷ lệ chết và bong khỏi bề mặt nuôi cấy khá lớn, nhưng những thế bào cố định được trên bề mặt ni cấy cho thấy tín hiệu chết theo chương trình khá rõ (Hình 3.25B). Kết hợp với hình ảnh của MCF7 ủ 20µg/ml, nhuộm nhân PI (Hình 3.26B) cho thấy màu đỏ khơng cịn chỉ tập trung ở vùng nhân mà còn rộng ra hầu khắp tế bào, chứng tỏ quần thể tế bào đang chết theo chương trình ở giai đoạn muộn hoặc có cả tế bào chết hoại tử (neucrosis) do tác động mạnh của chế phẩm ở nồng độ 20µg/ml.
Ở nồng độ 10 µg/ml, tế bào vẫn giữ được tính chất quần thể. Các tế bào chết theo chương trình biểu hiện khá rõ với tín hiệu màu xanh lá (Hình 3.25). Kết hợp với hình ảnh nhuộm nhân PI (Hình 3.26) cho thấy nhiều trường hợp tế bào chết khác nhau: Tế bào chết theo chương trình ở giai đoạn sớmvới biểu hiện bắt màu
A C B A C B a a b b c c
xanh lá của Annecxin V mà không bắt màu đỏ PI (mũi tên a), tế bào chết theo chương trình ở giai đoạn muộn với biểu hiện bắt màu xanh lá và bắt màu đỏ (mũi tên b) và cả tế bào không bắt màu xanh lá của Annecxin V nhưng bắt màu đỏ của PI cho thấy có thể tế bào đang chết khơng theo apoptosis. Như vậy, chế phẩm có tác dụng gây chết theo chương trình đối với MCF7 ngay ở nồng độ 10µg/ml nhưng tín hiệu Annecxin V trong thí nghiệm này khơng đại điện cho quần thể apoptosis giai đoạn sớm. Thời điểm đánh giá 24 giờ là muộn so với sự tác động của chế phẩm đối với dòng MCF7.
Kết quả gây u thực nghiệm cho chuột thí nghiệm
Sau khi nuôi cấy in vitro các tế bào nghiên cứu , thu lươ ̣ng tế bào đủ cho viê ̣c cấy ghép trên cơ thể chuô ̣t với tỉ lê ̣ 1,5x106 tế bào/conx30con. Trong thí nghiệm này chúng tơi cũng thực hiê ̣n c ấy ghép tế bào dưới da ở vùng ngực (lệch về phía bên trái).Kết quả gây u thực nghiệm thể hiện qua hình 3.27.