tỉnh Trà Vinh
3.3.1 Thời gian và địa điểm
- Thời gian: 06/2018-06/2019
- Địa điểm: Đối với dừa sáp thường: tại Trà Vinh dừa sáp thường tập trung ở huyện Cầu Kè với diện tích là 225 ha (Pḥịng Nơng nghiệp và phát triển Nơng thôn huyện Cầu Kè, 2017). Đối với dừa Sáp cấy phôi: Theo Phạm Thị Phương Thuý (2018), dừa sáp cấy phôi đã được trồng ở Trà Vinh từ năm 2008.
3.3.2 Phương tiện
- Các tài liệu có liên quan đến vấn đề nghiên cứu. - Bảng câu hỏi phỏng vấn.
- Máy ảnh, máy tính,…
3.3.3 Phương pháp nghiên cứu
3.3.2.1 Phương pháp thu thập số liệu
- Số liệu thứ cấp:
Nguồn: Sở NN&PTNT Trà Vinh, phòng NN&PTNT huyện Cầu Kè, Uỷ ban nhân dân xã và thị trấn.
Loại số liệu: Hình ảnh, bảng biểu, số liệu thống kê của các Ngành, báo cáo. Nội dung: điều kiện tự nhiên, kinh tế xã hội, tổng diện tích trồng, năng suất, sản lượng, nhận định, đánh giá tình hình.
- Số liệu sơ cấp:
Nguồn: hộ trồng dừa Sáp trên địa bàn tỉnh Trà Vinh
Nội dung: phỏng vấn trực tiếp người trồng dừa trên phiếu điều tra.
- Phương pháp chọn mẫu:
Địa bàn nghiên cứu của đề tài là huyện Cầu Kè đối với mơ hình dừa Sáp thường, chọn cụ thể 03 xã: xã Hòa Tân; xã Tam Ngãi; Thị trấn Cầu Kè. Đối với mơ hình dừa Sáp cấy phơi là tỉnh Trà Vinh.
+ Cỡ mẫu được xác định dựa vào phương pháp số lớn là 60 hộ (quan sát). Vì vậy, đề tài nghiên cứu trên 100% hộ trồng dừa sáp cấy phôi là 7 hộ và số hộ trồng dừa Sáp thường là 60 hộ.
Số liệu sơ cấp: Số liệu sơ cấp được thu thập thơng qua tiến trình sau:
- Liên hệ địa điểm điều tra chọn vùng nghiên cứu: liên hệ trao đổi xin ý kiến của các chuyên gia trong lĩnh vực nông nghiệp, cán bộ quản lý ở địa phương (Lãnh đạo Phòng NN & PTNT, lãnh đạo Trạm Khuyến nông, Trạm Bảo vệ thực vật, Hội làm
vườn.) để chọn địa bàn nghiên cứu cụ thể 3 xã: xã Hòa Tân, xã Tam Ngãi và Thị Trấn Cầu Kè đối với dừa Sáp thường và dừa Sáp cấy phôi là trên địa bàn tỉnh Trà Vinh.
- Thực hiện điều tra thử: tác giả tiến hành điều tra thử để kiểm tra tính phù hợp của phiếu điều tra, đồng thời hiệu chỉnh phiếu điều tra phù hợp với điều kiện thực tế ở địa bàn nghiên cứu.
- Thực hiện điều tra chính thức: Sau bước thực hiện điều tra thử và hiệu chỉnh phiếu điều tra, tiến hành điều tra chính thức.
3.3.2.2 Phương pháp phân tích số liệu
Số liệu khảo sát được kiểm tra, phân tích, mã hố và nhập dữ liệu vào chương trình Microsoft Excel Office 2013 và SPSS để tính tốn và phân tích dữ liệu.
- Sử dụng phương pháp phân tích thống kê mơ tả: Áp dụng tính tốn và trình
bày các chỉ tiêu kinh tế và các yếu tố ảnh hưởng đến tỷ lệ trái dừa sáp và chất lượng cơm dừa sáp (trung bình, độ lệch chuẩn, khoảng biến động, tần số, phần trăm)
- Phương pháp phân tích chi phí- lợi nhuận (CRA - Costs and Returns Analysis): Làm cơng cụ xác định hiệu quả tài chính của các hộ canh tác dừa Sáp ở
huyện Cầu Kè tỉnh Trà Vinh bao gồm: tỷ suất doanh thu/chi phí, tỷ suất lợi nhuận/chi phí, tỷ suất lợi nhuận/doanh thu.
- Các chỉ tiêu kinh tế
+ Tổng chi phí sản xuất bao gồm tất cả chi phí lao động (bao gồm lao động thuê và lao động cơ hội của gia đình), vật tư sản xuất và đầu tư cơ bản. Công lao động thường xuyên hàng ngày khơng đáng kể như thăm vườn thì khơng được tính. Chi phí vật tư sản xuất như phân bón, thuốc bảo vệ thực vật, nhiên liệu. Chi phí đầu tư cơ bản như giống, làm đất, đào ao/mương, máy móc, trang thiết bị thì được khấu hao theo từng năm. Các khoản chi phí khác liên quan đến lãi suất vốn đầu tư và các loại phí liên quan đến sản xuất thì khơng được tính.
3.3.2.3 Kiểm định giả thuyết:
Sử dụng phương pháp kiểm định Independent-Samples T test để so sánh 2 mơ hình dừa Sáp cấy phơi và dừa Sáp thường. Đặt giả thuyết
+ H0 : khơng có sự khác biệt giữa hai nhóm hộ + H1 : có sự khác biệt giữa hai nhóm hộ. Với mức ý nghĩa 5%, nguyên tắc quyết định là + Bác bỏ giả thuyết H0 nếu Sig.T < 0,5
+ Chấp nhận giả thuyết H0 nếu Sig.T > 0,5 CHƯƠNG 4
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Cải thiện kỹ thuật nhân giống dừa sáp từ phôi
4.1.1 Giai đoạn nảy mầm
4.1.1.1 Ảnh hưởng của tách màng bao phôi lên tỷ lệ nảy mầm của phôi dừa sáp
Theo Cueto et al. (2012) các phơi sau 2-3 tháng khơng nảy mầm thì tách màng bao phôi để phôi phát triển tốt hơn. Trong nghiên cứu tách màng phôi được thực hiện trên các phôi đã nuôi được 6 tuần trong môi trường Y3 cải tiến nhưng chưa nảy mầm.
Sự tăng nồng độ Kinetin dẫn đến sự hóa nâu của mẫu thí nghiệm có thể là do các hormon nội sinh của mẫu khơng tương khích với các hormon ngoại sinh mà ở đây cụ thể là Kinetin. Ngồi ra, có thể Kinetin làm tế bào tiết ra nhiều hợp chất phenol dẫn đến hóa nâu mẫu cấy nhanh hơn (Trương Quốc Ánh và ctv., 2012).
Kết quả trình bày ở Hình 4 .20 cho thấy, sau 1 tuần quan sát, các phơi đều chưa có dấu hiệu nảy mầm cho đến tuần thứ 2, nghiệm thức 2 (tách màng bao phơi) có tỉ lệ nảy mầm cao nhất đạt 66,67% và duy trì đến tuần thứ 4 mà khơng có thêm phơi nảy mầm. Ở nghiệm thức 3 (Y3 cải tiến + 1 mg/L Kinetin), chỉ có 7,55% phơi nảy mầm và duy trì cho đến hết 4 tuần. Nghiệm thức 4 (Y3 cải tiến + 2 mg/L Kinetin), tỉ lệ nảy mầm rất thấp chỉ đạt 3,78% và nảy mầm sau 3 tuần. Nghiệm thức 5 (Y3 cải tiến + 3 mg/L Kinetin) có tỉ lệ nảy mầm cao, 48,2% sau 4 tuần. Riêng nghiệm thức đối chứng khơng có phơi nảy mầm sau 4 tuần.
Tuần 10 Tuần 2 Tuần 3 Tuần 4
10 20 30 4 0 50 60 70 80 000 0 0 Y3 cải tiến Y3 cải tiến + cắt màng bao phôi Y3 cải tiến + 1ppm Kinetin Y3 cải tiến + 2ppm Kinetin Y3 cải tiến + 3ppm Kinetin
Hình 4.21: Sự hình thành chồi của nghiệm thức 2 (Y3 cải tiến + cắt màng bao phơi)
Hình 4.22: Phơi khơng hình thành chồi ở nghiệm thức 4 (Y3 cải tiến + 1 mg/L Kinetin Y3 cải tiến + không cắt màng bao phôi)
Kết quả ở Hình 4 .20, Hình 4 .21 và Hình 4 .22 cho thấy, phương pháp tách màng phôi đối với phôi không nảy mầm và được cấy nuôi trong môi trường Y3 cải tiến, các phôi tiếp tục nảy mầm. Đây là khâu rất quan trọng trong quy trình nhân giống dừa sáp cấy phơi để giảm tỷ lệ phôi bất thường và nâng tỷ lệ thành công.
4.1.1.2 Ảnh hưởng của ánh sáng lên độ nảy mầm của phôi dừa
Theo Nan et al. (2012) phơi được duy trì ở 27oC trong bóng tối từ 3-6 tháng đến khi lá đầu tiên xuất hiện. Sau đó chúng được tiếp xúc với ánh sáng 12 giờ. Taylor (1993) cũng cho rằng cây dừa sáp cấy phơi được ni cấy ở trong bóng tối cho đến khi phôi đã nảy mầm.
Nuôi cấy phôi dừa sáp ở điều kiện ở 29-30°C và độ ẩm 30-50%. Chúng được duy trì trong bóng tối hồn tồn trong giai đoạn tiền nảy mầm. Sau khi nảy mầm, phơi được chuyển vào phịng chiếu sáng 12 giờ (chỉ phôi được nảy mầm vào chiếu sáng) (Kennedy et al., 1997).
Tương tự các nghiên cứu trên, nghiên cứu đã ghi nhận được phơi dừa sáp thích hợp nảy mầm trong bóng tối đạt 8 phơi (80%) sau 5 tuần, cao hơn trong điều kiện có ánh sáng (phơi nảy mầm 70%).
TUẦN 10 TUẦN 2 TUẦN 3 TUẦN 4 TUẦN 5
10 20 30 40 50 60 70 80 90 0 0 0 0
PHÔI ĐƯỢC NUÔI TRONG ĐIỀU KIỆN SÁNG PHƠI ĐƯỢC NI TRONG ĐIỀU KIỆN TỚI
Hình 4.23: Ảnh hưởng của ánh sáng đến sự nảy mầm của phôi dừa sáp
Hình 4 .23 cho thấy, các phơi bắt đầu nảy mầm ở tuần thứ 3 sau khi cấy với tỷ lệ 28,6%, đối với nghiệm thức có chiếu sáng và 38,1% đối với nghiệm thức không chiếu sáng (tối), đến tuần thứ 4, nghiệm thức chiếu sáng đạt 38,1% và không chiếu sáng đạt 71,4%. Ở tuần thứ 5, nghiệm thức chiếu sáng đạt 47,6% và không chiếu sáng đạt 85,7%. Qua đó cho thấy, phơi dừa sáp nảy mầm trong điều kiện bóng tối đạt 6 phơi (85,7%) sau 5 tuần và trong điều kiện chiếu sáng phôi nảy mầm chỉ đạt 47,6%. Tuy nhiên, sự khác biệt giữa hai nghiệm thức khơng có ý nghĩa về mặt thống kê với t = 0,177.
Hình 4.24: Phơi được ni trong điều kiện tối hồn tồn (nhiều phơi đã nảy mầm)
Hình 4.25: Phơi được ni trong điều kiện có chiếu sáng (nhiều phơi chưa nảy mầm)
Trong thí nghiệm trên, ni phơi trong điều kiện có ánh sáng và điều kiện tối khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê. Tuy nhiên, qua Hình 4 .23, Hình 4 .24 và Hình 4 .25 cho thấy, nghiệm thức nuôi phôi trong điều kiện tối, phôi phát triển đều, nhanh và nhiều. Do đó, trong quy trình nhân giống dừa sáp cấy phôi, nuôi phôi trong điều kiện tối được chọn.
4.1.2 Giai đoạn tạo rễ
4.1.2.1 Nghiên cứu bổ sung mơi trường kích thích ra rễ, tạo lá khi cây phôi không ngập trong môi trường
Rễ cây là cơ quan dinh dưỡng quang trọng nhất của cây, có nhiệm vụ chủ yếu là hút nước và muối khống hịa tan trong nước để chuyển lên các cơ quan quang hợp bên trên. Cây có bộ rễ phát triển kém, ít đồng nghĩa cây đó có tốc độ sinh trưởng chậm (Hồng Minh Tấn và ctv., 2006).
Bảng 4 .12 cho thấy, khi phôi không ngập trong mơi trường thì cây sẽ phát triển lá chậm, nhiều trường hợp cây không phát triển lá. Cụ thể, ở nghiệm thức không bổ sung môi trường chiều dài rễ vẫn khơng thay đổi từ trước đến sau thí nghiệm là 10,4 cm, số lượng rễ thứ cấp thấp chỉ khoảng 1,4 rễ, gần như không tạo được lá và chiều cao cây khá thấp 6,5 cm. Ở nghiệm thức tối ưu 3 mg/L NAA, cây có chiều dài rễ 14,7 cm, số lượng rễ thứ cấp nhiều 4,7 rễ, tạo được gần 3 lá, và chiều cao cây đạt 28,9 cm.
Bảng 4.12: Kết quả bổ sung mơi trường kích thích ra rễ, tạo lá khi cây phôi không ngập trong môi trường ảnh hưởng đến sự ra rễ, lá và cao cây của cây dừa sáp in-vitro
Nghiệm thức rễ chính (cm)Chiều dài Số lượng rễthứ cấp Số lá Chiều dàithân (cm)
Không bổ sung môi
trường (Đối chứng) 10,4c 1,4d 0,3c 6,5d Y3 cải tiến + 2 mg/L NAA 12,7b 3,7b 2,3b 25,1c Y3 cải tiến + 3 mg/L NAA 14,7a 4,7a 2,9a 28,9a Y3 cải tiến + 4 mg/L NAA 13,6b 2,8c 2,5b 27,4ab Y3 cải tiến + 5 mg/L NAA 12,9b 2,7c 2,3b 25,8bc Mức ý nghĩa ** ** ** ** CV (%) 13,9 24,7 13,5 29,6
Ghi chú: Trong cùng một cột các số có ký tự theo sau giống nhau thì khơng có sự khác biệt ý nghĩa thống kê
Hình 4.26: Nghiệm thức được bổ sung mơi trường Y3 cải tiến + 3 mg/L NAA cây dừa có
bộ rễ phát triển tốt
Hình 4.27: Nghiệm thức đối chứng không bổ sung môi trường Y3 cải tiến + 3 mg/L NAA
cây dừa có bộ rễ phát triển kém
Trong quy trình nhân giống dừa sáp phơi, hệ thống rễ cây phơi có vai trị rất quan trọng, các nghiên cứu trước cho thấy, hệ thống rễ kém phát triển là nguyên nhân chính dẫn đến chết cây con khi chuyển ra mơi trường vườn ươm. Qua Hình 4 .26 và Hình 4 .27 chứng minh, phương pháp bổ sung môi trường Y3 cải tiến + 3 mg/L NAA giúp cây phôi phát triển hệ thống rễ tốt hơn, tăng tỷ lệ sống khi ra ngôi.
4.1.2.2 Nghiên cứu nồng độ chất điều hịa sinh trưởng kích thích ra rễ đối với các cây phôi sau 4 tháng nhưng chiều dài rễ nhỏ hơn 5 cm
Nghiên cứu của Nwite et al. (2017), bổ sung 1,0-1,5 mg/l NAA trong môi trường tạo rễ là thích hợp. Trong khi đó, kết quả nghiên cứu cho thấy, đối với các cây sau 4 tháng nhưng chiều dài rễ nhỏ hơn 5 cm sử dụng Y3 cải tiến + 3ppm IAA là thích hợp với chiều dài rễ chính, số lượng rễ thứ cấp, số lá, chiều dài thân đều cao hơn và khác biệt với các nhiệm thức cịn lại. Cụ thể, nghiệm thức ni cây phơi trong môi trường Y3 cải tiến + 3 ppm IAA cho kết quả tốt nhất với chiều dài rễ chính, số lượng rễ thứ cấp, số lá và chiều dài thân lần lượt là 13,6 cm, 3,3 rễ, 2,6 lá và 22,7 cm và có khác biệt có ý nghĩa thống kê ở mức 1% so với các nghiệm thức còn lại. Nghiệm thức đối chứng cây phơi phát triển kém nhất với chiều dài rễ chính, số lượng rễ thứ cấp, số lá và chiều dài thân lần lượt là 4,5 cm, 1 rễ, 1,5 lá và 14,5 cm (Bảng 4 .13).
Bảng 4.13: Nghiên cứu nồng độ chất điều hịa sinh trưởng kích thích ra rễ đối với các
cây phôi sau 4 tháng nhưng chiều dài rễ nhỏ hơn 5 cm
Nghiệm thức Chiều dài rễ chính (cm) Số lượng rễ thứ cấp Số lá Chiều dài thân (cm)
chứng)
Mơi trường Y3 cải tiến + 1 ppm IAA 5,4cd 1,0c 1,5c 16,4c
Môi trường Y3 cải tiến + 2 ppm IAA 6,1c 1,3c 1,6c 19,8b
Môi trường Y3 cải tiến + 3 ppm IAA 13,6b 3,3c 2,6a 22,7a
Môi trường Y3 cải tiến + 4 ppm IAA 12,7b 2,3c 2,3ab 20,1b
Môi trường Y3 cải tiến + 5 ppm IAA 12,3b 2,2b 2,1b 16,8c
Mức ý nghĩa ** ** ** **
CV 18,6 15,7 17,4 16,5
Ghi chú: Trong cùng một cột các số có ký tự theo sau giống nhau thì khơng có sự khác biệt ý nghĩa thống kê
qua phép thử Duncan. **: khác biệt ý nghĩa ở mức 1%;.*: khác biệt ý nghĩa ở mức 5% và ns: không khác biệt.
Hình 4.25 Cây ở nghiệm thức Y3 cải tiến + 3 ppm IAA
Qua kết quả nghiên cứu cho thấy, phương pháp cấy chuyền cây phôi sau 4 tháng nhưng chiều dài rễ < 5 cm vào môi trường Y3 cải tiến + 3 ppm IAA, hệ thống rễ phát triển tốt hơn, đây cũng là một giải pháp được lựa chọn để nâng tỷ lệ thành cơng cho quy trình ni cấy phơi dừa sáp.
4.1.2.3 Nghiên cứu cắt rễ để kích thích ra rễ, lá đối với các cây phơi khơng ngập trong mơi trường
Theo kết quả trình bày ở trên, khi phơi khơng ngập trong mơi trường thì cây sẽ phát triển lá chậm. Nghiên cứu cho thấy, khi cây phơi khơng cịn ngập trong mơi trường, tiến hành lấy cây ra khỏi mơi trường, cắt rễ sau đó cấy lại vào mơi trường Y3 cải tiến kết hợp 3 mg/L NAA cho kết quả tốt nhất và khác biệt với các nghiệm thức
cịn lại với chiều dài rễ chính 13,6 cm, số lượng rễ thứ cấp là 3,7 rễ, đạt khoảng 3 lá, chiều cao cây đạt 28,2 cm và và có khác biệt có ý nghĩa thống kê ở mức 1% so với các nghiệm thức còn lại. Nghiệm thức đối chứng cây phôi phát triển kém nhất với chiều dài rễ chính, số lượng rễ thứ cấp, số lá và chiều dài thân lần lượt là 10,1 cm, 1,2 rễ, 0,5 lá và 5,9 cm (Bảng 4 .14).
Bảng 4.14: Kết quả cắt rễ và cấy lại cho môi trường ngập rễ ảnh hưởng đến sự ra rễ, lá và cao cây của cây dừa sáp in-vitro
Nghiệm thức Chiều dài rễ chính (cm) Số lượng rễ thứ cấp Số lá Chiều dài thân (cm) Không cắt rễ (Đối chứng) 10,1d 1,2c 0,5c 5,9d
Cắt rễ + môi trường Y3 cải
tiến + 2 mg/L NAA 11,6c 2,7b 2,2b 22,3c
Cắt rễ + môi trường Y3 cải
tiến + 3 mg/L NAA 14,4a 3,7a 3,3a 28,2a
Cắt rễ + môi trường Y3 cải
tiến + 4 mg/L NAA 12,8b 3,2bc 2,4b 27,4ab
Cắt rễ + môi trường Y3 cải
tiến + 5 mg/L NAA 11,8c 3,1bc 2,1b 26,3b
Mức ý nghĩa ** ** ** **
CV (%) 16,7 18,9 17,3 26,3
Ghi chú: Trong cùng một cột các số có ký tự theo sau giống nhau thì khơng có sự khác biệt ý nghĩa thống kê