Phần 3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
3.4 Phương pháp nghiên cứu
3.4.3 Phương pháp chiết xuất
3.4.3.1. Chiết xuất bằng dung môi khác nhau
Mỗi mẫu 500g nấm Linh chi (cỡ hạt 0,8 mm, độ ẩm 5%) chiết xuất với các dung môi khác nhau: ethanol 96%, methanol 96%, isopropyl alcohol 96%, nước cất. Chiết xuất cùng điều kiện là ở nhiệt độ 60ºC, siêu âm cường độ 8W/cm2 ở tần số 20 kHz / bể siêu âm dung tích 20 lít, chiết xuất 6 phút. Dịch chiết được xác
định hoạt tính kìm hãm α-glucosidase.
3.4.3.2. Chiết xuất bằng nồng độ dung môi khác nhau
Mỗi mẫu 500g nấm Linh chi (cỡ hạt 0,8 mm, độ ẩm 5%) được khảo sát xác định theo nồng độ dung môi chiết xuất AGIs: 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 96%. Chiết xuất cùng điều kiện ở nhiệt độ 60ºC, siêu âm cường độ 8W/cm2 ở tần số 20 kHz / bể siêu âm dung tích 20 lít, chiết xuất 6 phút. Dịch chiết được xác định hoạt tính kìm hãm α-glucosidase.
3.4.3.3. Chiết xuất bằng các nhiệt độ khác nhau
Mỗi mẫu 500g nấm Linh chi, được khảo sát xác định chiết xuất ở các nhiệt độ, gồm: 25; 35; 45; 55 và 65 ± 20ºC. Chiết xuất cùng điều kiện: Dung môi 50% ethanol, siêu âm cường độ 8W/cm2 ở tần số 20 kHz / bể siêu âm dung tích 20 lít, chiết xuất 6 phút. Dịch chiết thơ được xác định hoạt tính kìm hãm α-glucosidase.
3.4.3.4. Chiết xuất bằng các tỉ lệ khác nhau giữa nấm Linh chi nguyên liệu và dung môi
Mỗi mẫu khảo sát xác định tỷ lệ nấm Linh chi nguyên liệu/dung môi đến khả năng chiết xuất AGIs có tỷ lệ như sau: 1/6; 1/8; 1/10; 1/12; 1/14; 1/16; 1/18.
Chiết xuất cùng điều kiện ở nhiệt độ 60ºC, siêu âm cường độ 8W/cm2 ở tần số 20
kHz / bể siêu âm dung tích 20 lít, chiết xuất 6 phút. Lấy mẫu phân tích ở các thí nghiệm khảo sát với lượng mẫu tương ứng cùng lượng nấm Linh chi là 100 g, mẫu đem lọc thu dịch chiết và xác định hoạt tính kìm hãm α-glucosidase.
3.4.3.5. Chiết xuất theo các mốc thời gian và cường độ sóng siêu âm khác nhau
Mỗi mẫu 500g nấm Linh chi, được khảo sát xác định chiết xuất ở các thời
gian và cường độ siêu âm khác nhau: 0 (không siêu âm), 2, 4, 6 và 8 W/cm2, thời
gian siêu âm chiết xuất là 0, 4, 8, 10, 12, 16, 18 và 22 phút. Chiết xuất cùng điều kiện: Dung môi 50% ethanol, tần số siêu âm 20kHz, bể siêu âm dung tích 20 lít. Dịch chiết thơ được xác định hoạt tính kìm hãm α-glucosidase (%).
3.4.4. Xác định điều kiện làm khô của chất chiết từ nấm Linh chi
3.4.4.1. Ảnh hưởng của nhiệt độ cô, sấy tạo chế phẩm đến chất lượng chế phẩm AGIs
Mỗi mẫu 1 lít dịch từ dịch chiết của nấm Linh chi (chiết xuất ở điều kiện:
nhiệt độ 60oC/ 10 phút siêu âm 20kHz với cường độ 8 W/cm2, chiết xuất ở tỷ lệ
định cô sấy ở các nhiệt độ khác nhau :50, 60,70, 80, 90 và 100±2ºC. Cô sấy cùng điều kiện - 0,8 atm, cao cô sấy khô đến độ ẩm 3,5%, được nghiền tạo chế phẩm AGIs, chế phẩm AGIs thu được đem xác định hoạt tính kìm hãm α-glucosidase và cảm quan chế phẩm AGIs tạo ra.
3.4.4.2. Thử nghiệm ứng dụng chế phẩm AGIs để tạo bột uống liền AGIs
Bảng 3.2. Tỷ lệ phối trộn các thành phần tạo ra sản phẩm bột hồ tan dạng
Cơng thức Thành phần Tỉ lệ
% mg/túi (300mg)
W1
Stevioside 0,5 1,5
Chế phẩm AGIs Linh chi 50,0 150,0
Lactose 49,5 148,5
W2
Stevioside 1,5 4,5
Chế phẩm AGIs Linh chi 50,0 150,0
Lactose 48,5 145,5
W3
Stevioside 1,0 3,0
Chế phẩm AGIs Linh chi 50,0 150,0
Lactose 49,0 147,0
W4
Stevioside 2,0 6,0
Chế phẩm AGIs Linh chi 50,0 150,0
Lactose 48,0 144,0
W5
Stevioside 2,5 7,5
Chế phẩm AGIs Linh chi 50,0 150,0
Lactose 47, 5 142,5
Tiến hành thử nghiệm: Người thử: Số lượng 12 người. Tiêu chí lựa chọn người thử: Là người 18 - 45 tuổi. Khơng có bệnh về giác quan. Có tinh thần hợp tác. Khơng ăn các sản phẩm có vị mạnh, khơng hút thuốc trước khi tiến hành thí nghiệm 2 giờ. Khơng sử dụng các mỹ phẩm (son mơi, nước hoa, xà phịng thơm) ngay trước khi làm thí nghiệm. Đến phịng thí nghiệm đúng giờ.
- Phép thử: Phép thử thị hiếu cho điểm thang 9 điểm thị hiếu. Mỗi công thức tạo bột uống liền được khảo sát có lượng mẫu là 100 túi/liều x 300 mg/túi, tiến hành trên 5 sản phẩm bột uống liền có thức W1, W2, W3, W4 và W5.
ngoài tầm quan sát của người thử. Tất cả các mẫu chuẩn bị phải giống nhau (cùng dụng cụ, cùng lượng sản phẩm, cùng dạng vật chứa…). Bột AGIs Linh chi
hoà tan sẽ được pha với nước cất ở nhiệt độ 900C, tỉ lệ 1 gói bột AGIs Linh chi
hồ tan (300 mg) / 100 ml nước. Mẫu sẽ được giữ ở nhiệt độ 500C và đem ra cho
người thử ở điều kiện nhiệt độ thí nghiệm.
- Cách thức trình bày mẫu: Mẫu được mã hóa bằng 3 chữ số ngẫu nhiên, thứ tự sắp xếp mẫu tn theo hình vng Williams.
Bảng 3.3. Mười trật tự trình bày mẫu tn theo ngun tắc hình vng Williams tương ứng với 5 mẫu khảo sát
STT Lần 1 Lần 2 Lần 3 Lần 4 Lần 5 STT Lần 1 Lần 2 Lần 3 Lần 4 Lần 5 1 A B E C D 6 D C E B A 2 B C A D E 7 E D A C B 3 C D B E A 8 A E B D C 4 D E C A B 9 B A C E D 5 E A D B C 10 C B D A E Với A: là W3; B: là W4; C: là W1; D: là W5 và E: là W2
- Điều kiện thí nghiệm: Phép thử được tiến hành trong phịng thí nghiệm cảm quan tuân theo tiêu chuẩn ISO 8589. Phải đảm bảo sạch sẽ, khơng có mùi lạ, thống mát và n tĩnh. Phịng thử được ngăn cách với khu chuẩn bị mẫu. Mỗi đợt 10 người thử. Độ chiếu sáng đồng nhất tại mọi vị trí trong phịng. Nhiệt độ
phịng duy trì ở nhiệt độ 20 ± 20C, độ ẩm tương đối từ 70 đến 85%.
- Tiến hành: Đánh giá cảm quan về mầu sắc, mùi, vị và trạng thái. Người thử nhận phiếu hướng dẫn. Người điều hành thí nghiệm giải thích cách tiến hành thí nghiệm cũng như nhiệm vụ của người thử. Người thử nhận lần lượt từng mẫu thử đựng trong ly thủy tinh đã mã hóa, cùng với phiếu trả lời tương ứng. Người thử thanh vị trước khi thử mẫu đầu tiên. Sau khi người thử đánh giá xong mẫu đó, thu lại phiếu trả lời cùng với mẫu cũ. Đưa mẫu tiếp theo cùng với phiếu trả lời tương ứng cho người thử, người thử cần thanh vị bằng nước lọc trước khi sử dụng mẫu tiếp theo. Sau khi người thử đánh giá xong 5 mẫu sẽ phát phiếu điều tra cho người thử.