- hút khô bằng bơm chân không
6.Tiến hành 1 Chuẩn bị mẫu.
6.1 Chuẩn bị mẫu.
Mẫu đất: mẫu thu tại hiện tr−ờng đ−ợc đựng trong bao bì chuyên dụng hoặc vật liệu thủy tinh có nút kín, bảo quản trong điều kiện lạnh –5 đến –10 0C tr−ớc khi tiến hành phân tích.
6.2 Xử lý mẫu
6.2.1 Chiết xuất chất chất độc D
+. Chiết lỏng siêu tới hạn: Cân khoảng 10 g mẫu đã đ−ợc nghiền nhỏ, cho vào ống nhựa polypropylen dung tích 100 ml có nắp đậy kín. Sau đó thêm 30 ml hỗn hợp dung môi n-hexan:aceton với tỷ lệ 4:1 vào ống, đậy lắp, dùng máy lắc lắc đều trong thời gian 15 phút. Sau hỗn hợp đ−ợc ly tâm với tốc độ 2500 v/phút trong thời gian 10 phút. Phần dịch đ−ợc gạn riêng vào bình có nắp kín. Lặp lại phần chiết 2 lần. Dịch lọc đ−ợc gộp lại và cô d−ới áp suất giảm cho tới khô. Cắn đ−ợc hòa tan trong khoảng 100 àl n-hexan.
+. Chiết bằng vi sóng: Cân khoảng 10 g mẫu đã đ−ợc nghiền nhỏ, cho vào bình Teflon có dung tích 100 ml có nắp đậy kín. Sau đó thêm 20 ml hỗn hợp dung môi n-hexan:aceton với tỷ lệ 2:1 vào ống, đậy lắp, dùng máy lắc lắc đều trong thời gian 2 phút. Sau đó cho bình Teflon vào lò vi sóng, đặt các công suất 30 w, trong thời gian 7 phút. Sau khi kết thúc hỗn hợp đ−ợc để nguội đến nhiệt độ phòng, rồi ly tâm với tốc độ 2500 v/phút trong thời gian 10 phút. Phần dịch đ−ợc gạn riêng vào bình có nắp kín. Lặp lại phần chiết 2 lần nh−ng lần thứ 3 chỉ cho 10 ml hỗn hợp dung môi. Dịch lọc đ−ợc gộp lại và cô d−ới áp suất giảm cho tới cạn. Cắn đ−ợc hòa tan trong khoảng 100 àl n-hexan.
6.2.2. Tinh chế mẫu. +. Chuẩn bị cột chiết.
Dùng cột C18 loại 200 mg để chiết, cột đ−ợc hoạt hóa bằng 5 ml methanol, tiếp theo 10 ml aceton. Sau đó cho toàn bộ 100 àl dung dịch n-hexan lên cột, dùng 500 àl n-hexan tráng và đ−a lên cột.
+. Tinh chế mẫu.
Dùng 20 ml n-hexan:aceton (2:1), phần dịch rửa đ−ợc hứng vào một ống nghiệm. Sau đó bay hơi dung môi tới khô d−ới dòng khí nitơ nhẹ.
6.2.3 Chuẩn bị mẫu phân tích
Thêm chính xác 1ml n-hexan tráng đều từ trên xuống d−ới, rồi tiến hành phân tích bằng máy GC-MS theo các điều kiện sau:
6.2.4 Phân tích trên GC-MS. 6.2.4.1 Điều kiện máy GC - Tốc độ dòng: 1,2 ml/phút - Nhiệt độ injector: 200 oC - Nhiệt độ detector : 280 0C - Cột sắc ký: HP-5MS : 0,25 mm x 30 m x 0,25 àm. Ch−ơng trình nhiệt độ cột: Ch−ơng trình nhiệt độ cột: Tốc độ tăng nhiệt độ ( 0C/Phút) Nhiệt độ cần đạt (0C)
Thời gian giữ ( Phút) 50 1 10 100 0 5 150 0 25 250 1 Tổng thời gian 21 phút 6.2.4.2 Điều kiện MS - Kiểu ion hoá: EI
- Điện thế nhân điện tử ( EMV) : 1650 v - Nhiệt độ nguồn: 230 0C
- Năng l−ợng ion hoá 69,9 eV - Chế độ quét : 3,25 scans/giây.
Khối phổ vận hành theo chế độ quét ion đầy đủ ( SCAN), các mảnh có số khối từ 50 - 450 sẽ đ−ợc ghi lại.
6.2.5. Kiểm tra độ lặp lại, độ chính xác của ph−ơng pháp.
Bơm 1 àl dung dịch chuẩn làm việc có nồng độ 10 ppm kiểm tra c−ờng độ tín hiệu, bơm lặp lại 5 lần để kiểm tra dộ lặp lại của thời gian l−u và diện tích pic.
6.2.6. Xây dựng đ−ờng chuẩn.
Bơm lần l−ợt 1 àl của các dung dịch chuẩn có nồng độ từ 1ppm, 5 ppm, 10ppm và 20 ppm. Dựa vào kết quả diện tích pic ta xây dựng đ−ờng chuẩn của chất độc D.
6.3. Đánh giá kết quả.
+ Đối với phân tích xác định chất độc D: Trên phổ khôi của mẫu cần có các mảnh đặc tr−ng: 109, 158, 63 m/z.
+ Phân tích định l−ợng: Hàm l−ợng chất độc D trong mẫu đất đ−ợc tính theo ph−ơng pháp đ−ờng chuẩn ngoại suy.
Tập thể tác giả
1. TSKH. Nguyễn Minh Khởi. 2. Ths. Vũ Công Sáu.
Hà nội, ngày 23 tháng 09 năm 2004
y kiến của thủ tr−ởng đơn vị
Viện Tr−ởng