Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.1. Nghiên cứu quy trình nuôi cấy tế bào PK 15 trên hệ thốngMicrocarrier
4.1.4. Xác định đường cong sinh trưởng tế bào PK 15 trên hệ thống
Microcarrier
Tiến hành thí nghiệm và đếm sốlượng tế bào tại các thời điểm 24h, 48h, 72h, 96h, 120h, 144h. Lặp lại thí nghiệm 3 lần thu được kết quảnhư sau:
Bảng 4.10. Kết quả sốlượng tế bào PK 15 theo thời gian nuôi cấy trên Microcarrier
Lô thí nghiệm
Số lượng tế bào (x 109tế bào/ml) TB đầu vào 24h 48h 72h 96h 120h 144h Lô 01 1,5 1,61 4,56 7,61 7,39 7,36 7,06 Lô 02 1,5 1,57 4,52 7,71 7,48 7,27 6,93 Lô 03 1,5 1,59 4,61 7,75 7,35 7,25 7,1 Trung bình 1,5 1,59 4,56 7,69 7,41 7,29 7,03 NSSS trung bình 1,06 3,04 5,13 4,94 4,86 4,69
Từ kết quả bảng trên chúng tôi tiến hành dựng biểu đồ đường cong sinh trưởng tế bào PK 15 trên hệ thống Microcarrier như hình:
Kết quả xây dựng đường cong sinh trưởng của tế bào PK 15 trên hệ thống Microcarrier 10 lít cho thấy: Giai đoạn 24 giờ sau nuôi các tế bào mới bám hạt hầu như chưa phát triển. Sau 24h nuôi cấy, khi các tế bào đã bám lên hạt ổn định và bắt đầu pha sinh trưởng và đạt cao nhất ở 72h sau nuôi cấy (tỷ lệ sinh sản ~1:5,13) so với ban đầu. Ở giai đoạn sau 72h nuôi cấy, số lượng tế bào có hiện tượng giảm nhẹ do một số tế bào chết bong tróc vào môi trường. Tuy nhiên sau đó thì sốlượng tếbào được duy trì tương đối ổn định do tế bào mới sinh ra lấp vào vị trí các tế bào chết đã bong.
Sau khi chốt các thông số cho quy trình nuôi cấy tế bào PK 15 trên hệ thống Microcarrier. Tôi tiến hành so sánh năng suất sinh sản tế bào thu được trên hệ thống Microcarrier với hệ thống T-flask đã được công ty áp dụng sản xuất trước đó tại các thời điểm thu hoạch: 24h, 48h, 72h, 96h thông qua đồ thị sau:
Hình 4.10. Đồ thịso sánh năng suất sinh sản tếbào thu được trên hệ thống Microcarrier và hệ thống T-flask
Nhìn vào hình 4.10 ta thấy năng suất sinh sản của tế bào PK 15 trên hệ thống Microcarrier cao hơn T-flask tuy nhiên sự chênh lệch không nhiều. Khi xét về mật độ tế bào trên một thể tích nuôi cấy thì tế bào PK 15 trên hệ thống Microcarrier cao hơn hẳn T-flask. Cụ thể tại thời điểm 72h nuôi cấy : trên T-flask thu được 320000 - 340000 tb/ ml còn trên hệ thống microcarrier thu được 770000 tb/ml. Như vậy, tế bào PK 15 nuôi trên hệ thống Microcarrier cao gấp 2 lần T- flask. Mặt khác, khi sử dụng công nghệ Microcarrier còn giảm thiểu nhận lực làm việc, giảm thiểu tạp trùng, hạn chế thao tác, hệ thống gọn không cồng kềnh, không
chiếm nhiều diện tích như T-flask. Chính vì vậy, tôi lựa chọn sản suất tế bào PK 15 bằng hệ thống Microcarrier.