II- Vật liệu, nội dung và ph−ơng pháp nghiên cứu.
3- Ph−ơng pháp nghiên cứu và các quy trình công nghệ sử dụng trong nghiên cứu.
- Thí nghiệm nuôi trồng, chọn tạo giống nấm linh chi đ−ợc thực hiện tại Trung tâm Công nghệ Sinh học Thực vật - Viện Di truyền Nông nghiệp.
- Khảo nghiệm giống triển khai rộng tại x−ởng sản xuất nấm ở các địa ph−ơng: + Xã Long H−ng, huyện Văn Giang, H−ng Yên
+ Xã Thanh Lãng, huyện Bình Xuyên, Vĩnh Phúc.
+ Ngoài ra còn sản xuất ở các tỉnh Hà Tây, Hòa Bình, Bắc Giang, Yên Bái, Sơn La, Quảng Nam, Bà Rịa Vũng Tàu.
- Về phần phân tích hóa sinh thực hiện tại Viện công nghệ sinh học, Viện y học cổ truyền Hà Tây.
- Thời gian nghiên cứu đề tài từ tháng 9/2001 đến tháng 9/2003. Mỗi năm sản xuất trên 2 vụ: thu đông từ T8-T12, xuân hè từ T1-T5.
2) Nội dung nghiên cứu.
2.1- Phân lập giống nấm từ quả thể bằng ph−ơng pháp nuôi cấy mô tế bào, sản xuất giống đem nuôi trồng, từ đó chọn tạo chủng giống tốt nhất có năng suất xuất giống đem nuôi trồng, từ đó chọn tạo chủng giống tốt nhất có năng suất cao, chất l−ợng tốt, phù hợp với điều kiện môi tr−ờng ở Việt Nam.
2.2- Theo dõi tốc độ mọc sợi của 5 chủng nấm linh chi trên môi tr−ờng C1, C2.
2.3- Theo dõi ảnh h−ởng của nhiệt độ tới tốc độ sinh tr−ởng của sợi nấm tìm ra đ−ợc nhiệt độ tối −u và thời vụ nuôi trồng. đ−ợc nhiệt độ tối −u và thời vụ nuôi trồng.
2.4- Nuôi trồng khảo nghiệm, triển khai sản xuất nấm thử nghiệm tại các địa ph−ơng. ph−ơng.
2.5- So sánh kết quả phân tích hóa sinh: thành phần hóa học quả thể chủng giống Dt đã đ−ợc chọn tạo với sản phẩm của Hàn Quốc, Trung Quốc. giống Dt đã đ−ợc chọn tạo với sản phẩm của Hàn Quốc, Trung Quốc.
3- Ph−ơng pháp nghiên cứu và các quy trình công nghệ sử dụng trong nghiên cứu. nghiên cứu.
3.1- Tất cả các chủng giống nấm linh chi chúng tôi đều tiến hành nuôi trồng thực nghiệm, thí nghiệm đ−ợc làm theo cùng 1 thời gian, địa điểm, lặp lại 3 lần. nghiệm, thí nghiệm đ−ợc làm theo cùng 1 thời gian, địa điểm, lặp lại 3 lần.
- Xử lý số liệu theo ph−ơng pháp thống kê sinh học.
3.2- Các quy trình công nghệ sử dụng trong nghiên cứu
3.2.1- Quy trình công nghệ chọn tạo giống nấm.
Sơ đồ quy trình công nghệ chọn tạo giống nấm
Chọn nguồn gen gốc có −u thế sinh học Quả thể nấm t−ơi Phân lập theo ph−ơng pháp nuôi
cấy mô tế bào
Giống gốc, bảo quản, l−u giữ nguồn gen Có kiểm tra định kỳ Đánh giá, tuyển chọn hệ sợi nấm Nhân giống C1, C2, C3 trên môi tr−ờng đặc tr−ng Đánh giá, tuyển chọn hệ sợi nấm
- Nuôi trồng khảo nghiệm - Sản xuất tại các địa ph−ơng
Đánh giá, tuyển chọn hệ sợi nấm
Theo dõi, đánh giá, tuyển chọn dòng quả
thể, hiệu quả kinh tế Chọn tạo nấm có suất, chất −ợng tốt chủng giống năng l
- Đánh giá năng suất, chất l−ợng sản phẩm
Sau khi phân lập tạo đ−ợc giống gốc trong môi tr−ờng thạch, chúng tôi tiến hành nhân giống để tạo giống C1, C2 và nuôi trồng rồi ghi tốc độ tăng tr−ởng của hệ sợi từng ngày bằng cách đo sự kéo dài của sợi theo thời gian.
3.2.2- Qui trình sản xuất giống gốc, giống C1 trong ống nghiệm.
Khoai tây gọt vỏ rửa sạch cắt nhỏ đun sôi khoảng 7’, rửa sạch giá đỗ cho vào xoong và đun tiếp 5-7’ lọc lấy n−ớc chiết rồi bổ sung thạch agar và đ−ờng theo tỷ lệ, khuấy đều đun sôi cho tan thạch, đổ ra ống nghiệm, hấp thanh trùng nhiệt độ 110-1150C với áp lực 0,9ữ1,1at, thời gian 90’, đặt nghiêng, để nguội, cấy giống.
3.2.3- Quy trình sản xuất giống cấp 2.
Thóc tẻ loại tốt, đãi sạch ngâm n−ớc lã từ 12-16 h, luộc sôi nở chín 2/3 hạt thóc, vớt ra để nguội trộn bột nhẹ 1,2-1,4%, tiến hành đóng chai, buộc đầu rồi hấp thanh trùng = autoclave 1,2-1,5at t−ơng đ−ơng nhiệt độ 120-1260C, thời gian là 90-100’, kể từ khi áp lực đạt đ−ợc, để nguội rồi cấy giống, nuôi sợi, bảo quản.
3.2.4- Qui trình nuôi trồng nấm linh chi trên mùn c−a.
Mùn c−a tạo ẩm bằng n−ớc vôi pH = 11ữ12, độ ẩm nguyên liệu từ 62- 65%, ủ lại đống lên men hiếu khí, thời gian ủ 3 ngày rồi đảo đống ủ, chỉnh độ ẩm, tạo độ xốp, chỉnh pH = 8-8,5 ủ lại đống thời gian ủ 2-3 ngày, bổ sung phụ gia và dinh d−ỡng (bột nhẹ, bột ngô, bột cám gạo) đóng bịch, thanh trùng để tiêu diệt mầm mống bệnh, tạo ra chất dễ tiêu, để nguội cấy giống thành 1 lớp trên bề mặt, định l−ợng 10ữ 15 gam giống/1 bịch, nuôi sợi chỉnh nhiệt độ, độ ẩm, độ thông thoáng, ánh sáng, mật độ bịch trong nhà nuôi sợi, thời gian nuôi sợi từ 20-25 ngày, chăm sóc thu hái chỉnh nhiệt độ, độ ẩm, độ thông thoáng, ánh sáng, thời gian 3-3,5 tháng.
- Nuôi trồng bịch nấm ở các điều kiện nhiệt độ khác nhau từ 15 - 350C, ghi nhận tốc độ ăn sợi, mật độ sợi , màu sắc của sợi và theo dõi kết quả năng suất của từng chủng nấm.