b) Tiêu chuẩn loại trừ
2.3.2.Xử lý tếbào gốc (loại hồng cầu và giảm thể tích dịch tế bào):
2.3.2.1. Chuẩn hoá qui trình xử lý tế bào gốc: ly tâm giảm hồng cầu và giảm thể tích đơn vị máu máu cuống rốn:
Để chuẩn bị dụng dịch tế bào cho bảo quản và sử dụng cho điều trị sau này, b−ớc này cần đạt 3 chỉ tiêu:
- Giảm khối l−ợng hồng cầu >50% (tế bào gốc dịch hút tuỷ x−ơng và MCR) - Tế bào gốc CD34 mất < 15%.
- Giảm thể tích huyết t−ơng, sao cho đậm đặc tế bào có nhân đạt 2.5*108/ml, tổng thể tích cho 1 đơn vị máu cuống rốn sau xử lý là 25 – 30ml
Có thể nói đây là bứơc rất quan trọng nhằm làm giảm thể tích bảo quản, giảm hồng cầu trong dung dịch bảo quản, tạo thuận lợi cho bảo quản tế bào gốc. Để đạt đựơc mục tiêu này chúng tôi đã tiến hành:
Xác định quy trình giảm hồng cầu bằng ph−ơng pháp ly tâm đạt kết quả tối −u nhằm tìm lực và thời gian ly tâm thích hợp mà ở đó số l−ợng hồng cầu mất đi tối đa và tế bào CD34 mất đi tối thiểu. Để xác định lực ly tâm thích hợp chúng tôi tiến hành: Cố định thời gian là 5 phút thay đổi lực ly tâm từ 100g đến 600g và tìm đ−ợc lực ly tâm thích hợp là 500g. Để tìm thời gian ly tâm thích hợp chúng tôi cố định lực ly tâm(500g) thay đổi thời gian từ 3-7 phút và tìm đ−ợc thời gian thích hợp là 5 phút. Sau nhiều lần điều chỉnh kết quả cho thấy quy trình ly tâm đạt 500g trong 5 phút kết quả tối −u. Quy trình này đ−ợc ứng dụng loại hồng cầu trong dịch tuỷ x−ơng và máu cuống rốn.
2.3.2.2.ứng dụng quy trình ly tâm ở trên, ly tâm các mẫu nghiệm, kết quả thu đ−ợc 3 lớp: d−ới cùng là khối hồng cầu, giữa là lớp huyết t−ơng giàu bạch cầu, trên cùng là huyết t−ơng giàu tiểu cầu.Khối hồng cầu bị loại bỏ, 2 lớp còn lại đựơc thu hồi gọi chung là huyết t−ơng giàu bạch cầu.