b) Tiêu chuẩn loại trừ
2.3.6. Các kỹ thuật sử dụng cho nghiên cứu:
•Định nhóm máu hệ ABO, Rh bằng huyết thanh mẫu và hồng cầu mẫu tại viện Huyết học – Truyền máu TW nhóm kháng nguyên bạch cầu HLA bằng ph−ơng pháp vi độc tế bào (micro-cytotoxicyty) của Terasaki[70].
•Kỹ thuật phân lập T lympho cho định nhóm HLA lớp I( HLA-A, B) và B lympho cho HLA lớp II (HLA- DR) bằng bông nilon(phụ lục 1)
•Kỹ thuật xác định số l−ợng tế bào máu bằng máy đếm tế bào tự động XT-2000i (Nhật), tại viện Huyết học – Truyền máu TW
• Kỹ thuật xác định dấu ấn màng tế bào CD34 bằng kháng thể đơn dòng của hãng Becton- Dickinson trên máy đếm tế bào theo dòng chảy FACS – Callibur (Nhật) tại BV TW quân đội 108.
•Kỹ thuật xác định các dấu ấn tế bào T (CD 3, 4, 8) tế bào B (CD19): bằng kháng thể đơn dòng của hãng Becton- Dickinson tại viện HH-TM TW.
•Kỹ thuật xác định các virus lây truyền qua đ−ờng truyền máu: kỹ thuật ELISA thế hệ 3 (Mix test) phát hiện anti-HIV 1và 2, ELISA thế hệ 3 (Mix test) phát hiện anti HCV, HBsAg, giang mai, sốt rét tại viện HH-TM TW (14)
•Kỹ thuật nuôi cấy đơn dòng hỗn hợp (Mix colony culture): sử dụng môi tr−ờng methylcellulose với các chất kích thích tổng hợp gồm: GF, IL-3, IL-6, Il- 1, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, erythropoietin, thrombopoietin[32] đ−ợc thành từ một tế bào gốc trong môi tr−ờng nuôi cấy bán lỏng và đ−ợc coi là colony khi có từ 20 tế bào trở lên(32) bao gồm: các colony đa dòng: CFU- GEMM, CFU - GM, các colony đơn dòng: CFU - E, CFU - G, CFU - M, CFU - Meg (hình 3).
AB B Hỡnh ảnh tạo cụm (colony) của tế bào gốc a dũng tuỷ Hỡnh ảnh tạo cụm tế bào gốc ầu dũng hồng cầu đ đ (A) (B)
Theo tài liệu của Broxmeyer (32)
Hỡnh ảnh tạo cụm (colony) của tế bào gốc đầu dũng hồng cầu
Hỡnh ảnh tạo cụm (colony) của tế bào gốc
ầu dũng bạch cầu hạt/ mono (CFU-GM). Tế bào phõn tỏn diện rộng
đ
Theo tài liệu của Broxmeyer (32)
Hỡnh ảnh tạo cụm (colony) của tế bào gốc mẫu tiểu cầu
Theo tài liệu của Broxmeyer (32)