PHẦN 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1.4. Tính ổn định của các chủng đột biến chọn lọc
Một trong những yêu cầu đối với các chủng vi sinh vật sử dụng trong công nghiệp là phải thuần khiết, ổn định về kiểu hình và kiểu gen, không bị hồi biến trong thời gian bảo quản và qua các thế hệ nuôi cấy. Tính ổn định về khả năng sản sinh enzyme của các chủng đột biến là thông số quan trọng, nó ảnh hưởng trực tiếp đến tính kinh tế của việc sản xuất các enzyme công nghiệp. Tính ổn định về khả năng sinh enzyme của chủng đột biến Aspergillus niger GA15 được xác định bằng việc cấy chuyển liên tiếp trên môi trường PDA trong 9 thế hệ. Sau mỗi lần nuôi cấy, tiến hành lên men xốp và tiến hành kiểm tra hoạt tính enzyme để xác định tính ổn định về khảnăng sản sinh enzyme của chúng.
Kết quả cho thấy, sau 9 thế hệ nuôi cấy, khả năng sản sinh 3 loại enzyme glucoamylase, α-amylase và cellulase của chủng đột biến Aspergillus niger GA15 được duy trì tương đối ổn định (P > 0,05), hoạt tính trung bình của 3 loại enzyme glucoamylase, α-amylase và cellulase sau 9 thế hệ qua lên men xốp lần lượt là 28,28; 38,42 và 12,51 (U/g) (Bảng 4.2). Điều này chỉ ra rằng dòng đột biến
Aspergillus niger GA15 này có đặc tính di truyền ổn định.
Bảng 4.2. Hoạt tính α-amylase, glucoamylase và cellulase của chủng đột biến
Aspergillus niger GA15 qua các thế hệ nuôi cấy
Thế hệ
Hoạt tính enzyme (U/g), (Mean ± SE), n=3
Glucoamylase (Mean ± SE) α-amylase (Mean ± SE) Cellulase (Mean ± SE) 1 27,15 ± 0,35 39,13 ± 0,5 12,81 ± 0,23 3 27,21 ± 0,85 38,62 ± 1,14 12,06 ± 0,85 5 29,67 ± 0,37 38,02 ± 0,75 12,36 ± 0,69 7 28,82 ± 1,09 38,21 ± 0,82 12,43 ± 0,55 9 28,54 ± 0,56 38,09 ± 0,52 12,87 ± 1,05 Trung bình 28,28 38,41 12,51
Li & cs. (2010) cũng cho biết các chủng đột biến thu được bằng gây đột biến bởi tia UV có khảnăng sản sinh cellulase ổn định qua 9 thế hệ. Theo nghiên cứu của Vu & cs. (2009) cho biết, chủng Aspergillus niger XTG-4 bịgây đột biến bởi tia X và hóa chất NTG, hoạt tính của các enzyme đều ở mức cao (hoạt tính của CMCase, FPase và β-glucosidase tương ứng ổn định ở mức 37,84 U/ml, 35,18 U/ml và 27,12 U/ml) trên cám lúa mì trong suốt 19 thế hệ theo dõi.
Như vậy, sau khi gây đột biến chủng nấm sợi Aspergillus niger A45.1 bằng tia UV và hóa chất NTG, lựa chọn được dòng đột biến Aspergillus niger
GA15 là dòng có hoạt tính đa enzyme glucoamylase, α-amylase, cellulase cao nhất và ổn định sau 9 thế hệ nuôi cấy với hoạt độ tương ứng lần lượt là 28,28; 38,41 và 12,51 (U/g).
4.1.5. Tối ưu điều kiện lên men xốp chủng nấm đột biến chọn lọc cho sinh tổng hợp đa enzyme (glucoamylase, α-amylase, cellulase)