Bước 1. Tạo giống hoạt hóa
Giống hoạt hóa được tạo ra từ giống gốc (Aspergillus niger GA15). Giống gốc là bào tử nấm được bảo quản trong glycerol 30% (đựng trong ống eppendorf), điều kiện lạnh sâu (-860C). Trước khi đem giống gốc đi hoạt hóa cần để ở nhiệt độ phòng trong khoảng 30 phút. Giống gốc được nuôi cấy trên môi trường PDA. Tiến hành trong box cấy vô trùng. Giống gốc được pha loãng (10-2 hoặc 10-3) rồi cấy trang: Hút 100µl dịch pha loãng trải vào đĩa Petri. Sau đó đem ủở 280C trong 5-7 ngày.
Bước 2. Tạo giống lỏng(V môi trường/V thể tích bình = 100ml/250ml):
Lấy các khuẩn lạc riêng rẽ và thuần khiết cấy vào bình tam giác 250ml chứa 100ml
môi trường lỏng cấp I, nuôi lắc 200 rpm, 280C, 2 ngày.
Bước 3. Tạo giống xốp
Chuẩn bịmôi trường lên men xốp:Cân 4kg cám mì, 40g ure, 40g glucose. Hòa ure vào HCl 0,01% cho tan hết trước khi đổnước vào cám mì. Trộn thật đều đểđảm bảo độ ẩm đồng đều, điều chỉnh độ ẩm ở50%. Chia môi trường xốp ra các túi nilon chịu nhiệt
đểđem hấp khử trùng.
- Tiến hành cấy giống trong tủ cấy vô trùng. Cơ chất cám mì đã cấp ẩm được cho ra
thau. Đổ giống vào thau chứa cơ chất, lượng giống 10% (500ml giống) trộn thật đều.
Sau đó phân hỗn hợp đã trộn ra các khay nhựa và khay inox. Ủ các khay nuôi cấy ở
300C trong 5 ngày.
Bước 4: Lên men xốp sản xuất đa enzyme
Chuẩn bịmôi trường lên men xốp: Môi trường cho lên men xốp cần: cám mì, HCL
0,01%, ure, glucose, nước, trấu (Sản xuất quy mô lớn cần trộn thêm 5-10% trấu để làm
môi trường nuôi cấy được xốp). Như vậy, quy mô 100kg/mẻ cần sử dụng 75kg cám mì, 20 lít HCl 0,01%, 5kg trấu, 100g ure, 100g glucose. Trộn thật đều các nguyên liệu đểđảm bảo độẩm đồng đều.
Giống xốp tạo ra ởbước 3 cần được đánh thật tơi, sau đó thêm nước theo tỉ lệ 1:1
trước khi cấy. Sau khi chuẩn bị xong, cả giống và môi trường tiếp tục được trộn đều trong các thiết bị trộn quy mô sản xuất. Sau đó phân hỗn hợp đã trộn ra các khay. Ủ các khay nuôi cấy ở 300C trong 5 ngày.
Bước 5. Thu chế phẩm thô
Giống xốp sau nuôi cấy được 5 ngày tiến hành thu bằng cách làm rời thật nhỏvà tơi
Bước 6. Sấy và đóng gói kín khí
Sau khi làm tơi ởbước 5, sản phẩm được để nguyên trong các khay sản xuất rồi mang sấy ở 700C trong 3h
Bước 7. Đóng gói
Sau khi sấy đen sản phẩm đóng gói kín khí trong các túi thiếc, lượng chế phẩm khoảng 0,5kg/túi.
Bước 8. Bảo quản
Bảo quản chế phẩm ởđiều kiện phòng, nơi khô ráo, thoáng mát, tránh sự xâm nhập của côn trùng.