L ời cảm ơ n
3.2.3.Kết quả tinh chế TrxHa1 và nghiên cứu khả năng nhận biết TrxHA1
Protein HA1 được tinh chế theo qui trình đã được mô tả chi tiết ở phần phương pháp. Kết quả, protein sau khi tinh chế có kích thước khoảng 57 kDa đúng như kích thước tính toán. Đồng thời, để kiểm tra độ sạch của protein, chúng tôi đã điện di protein trên gel polyacrylamide và nhuộm Coomassie Blue. Sau đó, gel được quét vào máy và đưa vào phần mềm Quantitative one để xác định độ tinh sạch. Kết quả kiểm tra cho thấy HA1 có độ sạch khoảng 90,24% (Hình 3.13) .
3.2.4. Kết quả kiểm tra tính đặc hiệu của kháng nguyên
Chúng tôi tiến hành kiểm tra tính đặc hiệu của kháng nguyên tái tổ hợp thông qua khả năng liên kết kháng nguyên tái tổ hợp với kháng thể đa dòng ở gà kháng lại
chủng virus làm vaccine H5N1 bằng phản ứng Western Blot (Hình 3.14).
Hình 3.14. Phân tích khả năng liên kết giữa kháng nguyên tái tổ hợp với kháng thể kháng
virus H5N1. A: Protein trên gel polyacrylamid được nhuộm Coomassie blue R250; B:
Màng được phủ với kháng thể trong huyết thanh gà kháng chủng virus H5N1; C: Màng
được phủ với kháng thể trong huyết thanh gà sạch; 1: Thang protein chuẩn (Fermentas); 2:
Protein từ chủng E. coli BL21 mang pET22trx; 3: Protein TrxHa1 tinh sạch.
Quan sát trên màng PVDF (Hình 3.14) cho thấy, trên đường chạy protein đối chứng tách chiết từ chủng vi khuẩn E. coli BL21 tái tổ hợp không mang gen HA1 chúng tôi thấy không xuất hiện băng màu có kích thước tương ứng với protein HA1. Trong khi đó trên đường chạy protein HA1 tinh chế thấy xuất hiện băng rất rõ nét khi màng được phủ với kháng thể từ huyết thanh gà kháng H5N1 và màng phủ với kháng thể từ huyết thanh gà sạch không thấy xuất hiện băng protein này. Điều đó chứng tỏ kháng nguyên tái tổ hợp TrxHA1 được tổng hợp trong E. coli chứa quyết định kháng nguyên nằm trên tiểu phần HA1. Như vậy, protein HA1 của virus cúm A/H5N1 đã được biểu hiện thành công dưới dạng dung hợp với Thioredoxin.