L với nồng độ ion Hg(II) Theo đó, cường độ huỳnh quang dung dịc h giảm mạnh
b. Khảo sát phản ứng giữa sensor AMC với Cys
Mối quan hệ giữa tỷ lệ cường độ huỳnh quang của dung dịch thu được ở hai bước sóng 450nm và 375 nm (F450/375) với nồng độ Cys đã được khảo sát và trình bày ở Hình 3.34a. Kết quả cho thấy, khi thêm Cys trong khoảng nồng độ từ 0 đến 10 μM vào dung dịch AMC (10 μM), tỷ lệ cường độ huỳnh quang ở hai bước sóng 450nm và 375 nm (F450/375) có quan hệ tuyến tính chặt chẽ với nồng độ Cys. Sau đó, tỷ lệ này thay đổi không đáng kể nếu tiếp tục tăng nồng độ Cys. Điều này cho thấy phản ứng giữa AMC với Cys xảy ra theo tỷ lệ mol 1:1.
Hình 3.34. (a) Mối quan hệ giữa tỷ lệ cường độ huỳnh quang của AMC ở hai bước sóng 450 nm và 375 nm(F450/375) ở 3.33b với nồng độ Cys;(b) Đồ thị xác định hệ
số tỷ lượng phản ứng giữa AMC với Cys
Quá trình xác định thành phần của phản ứng giữa AMC với Cys được thực hiện theo phương pháp đồng phân tử gam trong C2H5OH/HEPES (1/4, v/v) ở pH
=7,4, bước sóng huỳnh quang 450 nm, bước sóng kích thích 320 nm, với [AMC]+[Cys] = 10 µM được trình bày ở trình bày ở Hình 3.34b. Kết quả cũng chỉ
[Cys]/x10 μM F45 0/ 37 5 C ườ ng đ ộ hu ỳn h qu an g tạ i 4 50 n m
O
Kết luận trên cũng được khẳng định khi nghiên cứu phổ khối lượng của sản phẩm phản ứng giữa AMC và Cys, bằng chứng trong phổ khối lượng xuất hiện các mũi: m/z = 352,08 (ứng với AMC-Cys+H+) và m/z = 374,07 (ứng với
AMC-Cys+Na+) (Hình 3.35).
Hình 3.35. Phổ khối của AMC-Cys
Những dữ liệu phân tích trên khẳng định rằng AMC phản ứng với Cys theo tỉ lệ mol 1:1. Sơ đồ phản ứng giữa AMC và Cys hình thành thioester được trình bày ở Hình 3.36. HOOC O H2N SH O O O O COOH O S AMC AMC-Cys NH2
Hình 3.36. Sơ đồ phản ứng giữa AMC với Cys
Tương tự như Cys, khi thêm GSH và Hcy trong khoảng nồng độ từ 0 đến 10 μM vào dung dịch AMC (10 μM), tỷ lệ cường độ huỳnh quang ở hai bước sóng 450 nm và 375 nm (F450/375) có quan hệ tuyến tính chặt chẽ với nồng độ GSH và Hcy (Hình 3.37). Sau đó, tỷ lệ này thay đổi không đáng kể nếu tiếp tục
GHS và Hcy xảy ra theo tỷ lệ mol 1:1.
Hình 3.37. Mối quan hệ giữa tỷ lệ cường độ huỳnh quang (F450/375) của dung dịch AMC (10 μM, C2H5OH/HEPES, pH =7,4, 1/4, v/v, tại
25 oC) với nồng độ Cys, GSH và Hcy