Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.1. Kết quả kiểm tra tính vô trùng của vacxin
Vô trùng là một yêu cầu bắt buộc cần phải kiểm nghiệm đối với tất cả các sản phẩm vacxin. Đây là một trong những thử nghiệm quan trọng để kiểm soát chất lượng vacxin nhằm phát hiện tác nhân ngoại lai là các vi sinh vật sống nhiễm vào sản phẩm. Thử nghiệm vô trùng không chỉ thực hiện ở giai đoạn thành phẩm mà còn phải thực hiện ở nhiều giai đoạn trong quá trình sản xuất.
Môi trường Thioglycolat (TGC) được sử dụng để phát hiện vi khuẩn hiếu khí và kị khí. Công thức của môi trường phù hợp cho sự phát triển của nhiều loại vi khuẩn hiếu khí và kị khí khác nhau. Trước khi sử dụng môi trường cho thử
nghiệm, môi trường được tiến hành kiểm tra độ nhạy để đảm bảo môi trường có dinh dưỡng phù hợp cho sự phát triển của vi khuẩn hiếu khí và kị khí, làm tăng độ tin cậy của kết quả thử nghiệm.
Tiến hành thử nghiệm vô trùng với 5 mẫu vacxin được lấy ngẫu nhiên trong lô vacxin nhập khẩu trên môi trường TGC. Kết quả kiểm tra như sau:
Bảng 4.1. Kết quả kiểm tra tính vô trùng của vacxin trên môi trường TGC
Môi trường V gây nhiễm Ngày đọc Mẫu TGC (36~38oC) 0.5ml/ống 1ml/ống 3-5 7-9 14 3-5 7-9 14 1 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 3 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 4 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 5 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 Đối chứng 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1
Kết quả ở bảng 4.1 cho thấy:
Tại các thời điểm theo dõi các ống thử, không xuất hiện bất kỳ ống thử nào cho kết quả dương tính. Các ống môi trường đều trong, màu sắc không thay đổi so với trước khi cấy vacxin (giống ống đối chứng).
Như vậy, có thể kết luận: Các mẫu vacxin không bị nhiễm vi khuẩn hiếu khí và kị khí.
Môi trường Soybean Casein Digest (SCD) được sử dụng để phát hiện vi khuẩn hiếu khí và nấm trong sản phẩm. Để làm tăng độ tin cậy của kết quả thử nghiệm, trước khi sử dụng môi trường, tiến hành kiểm tra độ nhạy để đảm bảo môi trường có dinh dưỡng phù hợp cho sự phát triển của vi khuẩn hiếu khí và nấm.
Tiến hành thử nghiệm vô trùng với 5 mẫu vacxin được lấy ngẫu nhiên trong lô vacxin nhập khẩu trên môi trường SCD. Kết quả kiểm tra như sau:
Bảng 4.2. Kết quả kiểm tra tính vô trùng của vacxin trên môi trường SCD Môi trường Môi trường V gây nhiễm Ngày đọc Mẫu SCD (20~25oC) 0.5ml/ống 1ml/ống 3-5 7-9 14 3-5 7-9 14 1 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 3 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 4 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 5 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 Đối chứng 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1
Kết quả ở bảng 4.2 cho thấy:
Không có bất kỳ ống thử nào xuất hiện hiện tượng nổi váng, lắng cặn hoặc môi trường trở nên đục tại các thời điểm theo dõi. Tất cả các ống thử đều trong, không thay đổi màu sắc so với trước khi cấy mẫu (giống ống đối chứng). Như vậy, có thể kết luận rằng: các mẫu vacxin thử nghiệm không bị nhiễm vi khuẩn hiếu khí và nấm.
Trong thử nghiệm vô trùng của vacxin, nếu có dấu hiệu phát triển của vi khuẩn và nấm trong các ống môi trường, rất khó phân biệt hiện tượng nhiễm này là do bản thân vacxin hay nhiễm từ bên ngoài vào trong quá trình thực hiện thử nghiệm. Ngược lại, nếu môi trường nuôi cấy không đảm bảo cho vi khuẩn và nấm phát triển sẽ dẫn đến việc bỏ qua hàng loạt các lọ vacxin nhiễm khuẩn. Do đó, thử nghiệm vô trùng được thực hiện trong một điều kiện được kiểm soát nghiêm ngặt về áp xuất, nhiệt độ, độ ẩm, tốc độ trao đổi khí và giám sát vi sinh, môi trường nuôi cấy được hấp vô trùng và thử độ nhạy trước khi sử dụng. Điều này làm tăng tính tin cậy của kết quả nghiên cứu cũng như đảm bảo an toàn cho các sản phẩm vacxin khi lưu hành.
Thử nghiệm sử dụng hai loại môi trường là TGC và SCD để kiểm tra vi khuẩn và nấm trong vacxin. Hai môi trường này có nhiều ưu điểm và được sử dụng phổ biến tại các phòng kiểm định vacxin cho thử nghiệm vô trùng. Yếu tố này góp phần làm tăng tính tin cậy của kết quả nghiên cứu.
Kết quả kiểm tra các mẫu vacxin trên cả hai loại môi trường SCD và TGC đã chứng tỏ không có bất kỳ loại vi khuẩn hiếu khí, kị khí hay nấm nào được
phát hiện qua các thời điểm theo dõi là 3 – 5 ngày, 7 – 9 ngày và 14 ngày sau khi cấy mẫu. Như vậy, vacxin được đánh giá là đạt tiêu chuẩn vô trùng.