CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.4. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.1.2. Đông khô thử nghiệm vắc xin BCG trên ống 2ml đã xác định thông
thông số kỹ thuật
Ống 2ml có định vị bẻ đƣợc đã xác định đƣợc thông số kỹ thuật phù hợp với trang thiết bị hiện có tại IVAC: máy súc rửa Bausch+Strolbel, syringe Cornwall, máy hàn chân không Kumabe ES-1500. Chúng tôi tiến hành đông khô thử nghiệm 6 lô vắc xin BCG trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc. Sử dụng cùng một lô vắc xin BCG bán thành phẩm, tách riêng 1 phần để phân liều và đông khô trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc (gọi là lô thí nghiệm – TN). Mỗi lô thí nghiệm (TN) đông khô 400 ống. Phần vắc xin BCG bán thành phẩm còn lại đƣợc thực hiện theo quy trình chuẩn sản xuất vắc xin BCG của IVAC (gọi là lô đối chứng - ĐC). Mỗi lô đối chứng (ĐC) khoảng 7000 ống.
Đông khô thử nghiệm 6 lô thí nghiệm liên tiếp (TN1, TN2, TN3, TN4, TN5 và TN6) và 6 lô đối chứng tƣơng ứng (ĐC1, ĐC2, ĐC3, ĐC4 và ĐC6). Các lô thí nghiệm và lô đối chứng đƣợc phân liều, đông khô và hàn ống trong cùng điều kiện.
37
Sơ đồ qui trình sản xuất và kiểm định vắc xin BCG
Hình 2.4. Sơ ồ quy trình sản xuất vắc xin BCG (Nguồn: Viện Vắc xin và Sinh phẩm y tế, 2020) [37].
Chủng gốc 1173 P2 Lot C/WS Cảm quan, vô trùng -Vô trùng -An toàn đặc hiệu -Vô trùng - Mật độ quang - Độ phân tán - Độ sống tƣơi - Vô trùng tƣơi Kiểm tra -Vô trùng - Nhận dạng
-An toàn không đặc hiệu -Mật độ quang -Độ phân tán -Cảm quan -Độ ẩm tồn dƣ -Tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất -Chân không -Độ sống -Ổn định nhiệt Kiểm định
Giai đoạn nuôi cấy, pha chế vắc xin tƣơi
Giai đoạn đông khô, hàn ống chân không
Giai đoạn đóng gói thành phẩm
Nhân chủng
Cấy chuyền sản xuất
Gặt, nghiền sinh khối
Pha chế vắc xin tƣơi
Phân ống 2ml có định vị bẻ đƣợc và không bẻ đƣợc Đông khô Hàn ống chân không Đóng gói Biệt trữ
38
Qui trình sản xuất vắc xin BCG
Nhân chủng (S1): Đƣa BCG từ ống chủng sản xuất 1173 P2 lot C/WS vào môi trƣờng Sauton, theo dõi 21 ngày ở nhiệt độ 37 ±1o
C. Quan sát màng BCG khô, có màu vàng nhạt, xếp đều đặn trên bề mặt bình Sauton. Tiến hành cấy chuyền sản xuất.
Cấy chuyền sản xuất (S2): Chuyền màng BCG từ bình S1 sang môi trƣờng Sauton. Tiêu chuẩn đánh giá trƣớc khi gặt: màng BCG màu vàng tƣơi, mọc dày, xếp đều đặn trên bề mặt bình Sauton.
Gặt, pha chế vắc xin tươi: màng BCG (S2 ) sau 6-7 ngày trên môi trƣờng Sauton đạt tiêu chuẩn về cảm quan (màu sắc, độ leo), gặt thu sinh khối bằng bộ lọc Birkhaug. Đƣa sinh khối vào nghiền và pha với Glutamate Natri 1,5% để có đậm độ 50mg/ml.
Pha bán thành phẩm: Vắc xin BCG đƣợc pha với tá chất Glutamat Natri 1,5% để có đậm độ 2,5mg/ml
Phân ống: Quá trình phân ống đƣợc thực hiện theo qui trình chuẩn sản
xuất vắc xin BCG của IVAC, bằng bơm tiêm phân liều (Syringe Cornwall) đã đƣợc chuẩn định. Trong suốt quá trình phân ống vắc xin BCG phải đƣợc đặt lên trên máy khuấy từ và giữ ở nhiệt độ 2-8oC. Sau khi phân ống, dùng máy lắc đều để vắc xin BCG không bị lắng trƣớc khi làm đông.
Đông khô: Vắc xin BCG đƣợc đƣa vào đông khô trên máy đông khô CNME với 2 giai đoạn làm đông và làm khô. Giai đoạn làm đông đƣợc thể hiện ở 2 cấp:
o Làm đông cấp I ở nhiệt độ -30oC trong 4 -6 giờ o Làm đông cấp II ở -42oC, thời gian làm đông ≥ 8 giờ
Tổng thời gian của giai đoạn làm đông không đƣợc ít hơn 12 giờ và nhiệt độ sau cùng vắc xin BCG kết thúc giai đoạn làm đông là -38oC ± 2o
C. -Vắc xin BCG đƣợc làm khô trong điều kiện chân không và cũng đƣợc thực hiện 2 cấp:
oLàm khô cấp I (giai đoạn tách nƣớc tự do): từ 4 - 5 giờ trong điều kiện chân không ≤ 20 Pa và nhiệt độ giàn ngƣng tụ ≤ -50oC. Nhiệt độ vắc xin
39
trong giai đoạn này sẽ tăng dần, khi kết thúc giai đoạn làm khô cấp I, chân không trong buồng máy đông khô giảm xuống ≤ 6 Pa chuyển sang làm khô cấp II.
oLàm khô cấp II (giai đoạn tách nƣớc liên kết): giai đoạn này nhiệt độ đƣợc kích hoạt tăng lên, nhiệt độ sau cùng của vắc xin tùy thuộc vào nhiệt độ này. Nhiệt độ sau cùng của vắc xin đƣợc xác định là nhiệt độ khi kết thúc quá trình đông khô.
Hàn ống: Các ống vắc xin đƣa vào hàn kín trên máy hàn chân không KUMABE ES-1500. Tỉ lệ loại bỏ chân không lúc hàn không quá 2%.
Đóng gói: Vắc xin BCG đƣợc kểm tra cảm quan, kiểm tra chân không trƣớc khi đóng hộp. Một hộp vắc xin chứa 20 ống, mỗi ống 10 liều.
Biệt trữ: Vắc xin BCG trƣớc khi xuất xƣởng đƣợc kiểm tra các chỉ tiêu: vô trùng, nhận dạng, an toàn không đặc hiệu, mật độ quang, độ phân tán, cảm quan, độ ẩm tồn dƣ, tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất, chân không, độ sống, ổn định nhiệt.
Vắc xin BCG đƣợc bảo quản ở nhiệt độ 2-8oC, hạn dùng 30 tháng.
Đánh giá kết quả:
- Tất cả 6 lô vắc xin BCG thử nghiệm và 6 lô đối chứng đƣợc đánh giá chất lƣợng theo tiêu chuẩn xuất xƣởng [10; 30].
- Thống kê tỷ lệ loại bỏ trong suốt quá trình sản xuất bao gồm: tỷ lệ phần trăm gãy vỡ trong quá trình súc rửa, hàn ống, kiểm tra vật lý, tỷ lệ loại do không đạt chân không. So sánh với tỷ lệ loại bỏ của ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa để bẻ đang sử dụng hiện nay qua các giai đoạn.
2.4.2. Sản xuất thử nghiệm và giám sát chất lƣợng vắc xin BCG sản xuất tr n ống 2ml có ịnh vị bẻ ƣợc