CHƢƠNG 3 : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2.1.5.Kết quả an toàn
3.2. KẾT QUẢ SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM 3LÔ VẮC XIN BCG ĐÔNG
3.2.1.5.Kết quả an toàn
Kiểm tra an toàn đặc hiệu
Kiểm tra an toàn đặc hiệu là kiểm tra xác định không có sự xuất hiện của Mycobacterium độc, đƣợc đánh giá thông qua theo dõi tình trạng sức khỏe của chuột lang trong suốt thời kỳ thử nghiệm và kết quả khám xét chuột để phát hiện tình trạng bệnh lý nhiễm lao của chuột thử nghiệm.
Tất cả chuột lang sau khi tiêm vắc xin BCG đều sống, khỏe mạnh, tăng cân (hình 3.6) và không có dấu hiệu của lao tiến triển. Nhƣ vậy vắc xin BCG lô 488-10-20; 489-10-20, 490-10-20 đều đạt yêu cầu về an toàn đặc hiệu theo tiêu chuẩn WHO/TRS 979, 2013 và DĐVN V, 2017.
Hình 3.6. Tỉ lệ tăng trọng lƣợng chuột lang theo thời gian
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 T1 T2 T3 T4 T5 T6 488-10-20 489-10-20 490-10-20 Tuần %
63
An toàn chung
Một mẫu an toàn chung đƣợc thực hiện tiêm trên 5 chuột nhắt trắng khỏe mạnh, trọng lƣợng 17-22g/con. Chuột đƣợc cân trƣớc trƣớc khi kiểm tra, cân sau 3 ngày và sau 7 ngày. Kết quả trọng lƣợng chuột nhắt trong thử nghiệm an toàn chung đƣợc thể hiện ở Hình 3.7.
Hình 3.7. Trọng lƣợng chuột nhắt theo thời gian
Theo hình 3.7 cho thấy trọng lƣợng chuột nhắt của cả 3 lô vắc xin BCG khỏe mạnh, lên cân sau 7 ngày theo dõi. Các lô vắc xin BCG 488-10-20; 489- 10-20, 490-10-20 đều đạt yêu cầu về an toàn chung theo tiêu chuẩn WHO/TRS 979, 2013 và DĐVN V, 2017.
Qua 13 chỉ tiêu chất lƣợng đƣợc kiểm tra, cả 3 lô vắc xin BCG 488-10- 20, 489-10-20 và 490-10-20 sản xuất thử nghiệm trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc với độ dày vòng sơn cổ 0,9±0,1mm, lực bẻ 93,30N là phù hợp với dây chuyền công nghệ sản xuất và đạt tiêu chuẩn chất lƣợng đăng ký (Dƣợc điển Việt Nam V, 2017 và WHO TRS 979, 2013).
10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 T0 T3 T7 488-10-20 489-10-20 490-10-20 Thời gian gram
64
3.2.2. Giám sát chất lƣợng vắc xin BCG sản xuất tr n ống 2ml có ịnh vị bẻ ƣợc
Lô vắc xin BCG 488-10-20 là lô vắc xin đầu tiên chứa trong ống 2ml có định vị bẻ đƣợc không dùng vật liệu tạo vết khứa. Đến tháng 12/2021, IVAC đã sản xuất đƣợc 60 lô vắc xin BCG trên ống có định vị bẻ đƣợc, tƣơng đƣơng 9.600.000 liều. Kết quả kiểm định chất lƣợng tại IVAC và Viện kiểm định quốc gia đạt tiêu chuẩn đăng ký, đủ điều kiện xuất xƣởng.
Chất lƣợng của vắc xin BCG sản xuất trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc giám sát thông qua theo dõi các chỉ tiêu chất lƣợng trên biểu đồ Shewhat chat có so sánh với số liệu kiểm định của các lô vắc xin BCG sản xuất trƣớc đó (trên ống không có định vị bẻ đƣợc). Kết quả so sánh trên 60 lô vắc xin BCG mỗi loại đƣợc trình bày dƣới đây:
3.2.2.1. Chất lượng về độ sống vắc xin BCG
Hình 3.8. Kết quả ộ sống của vắc xin BCG 2 loại ống chứa vắc xin
Theo hình 3.8 độ sống của vắc xin BCG đƣợc sản xuất trên 2 loại ống có định vị bẻ đƣợc và ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa có kết quả ổn định và nằm trong khoảng TB ± 2SD, độ sống dao động từ 2,5 x106đvs/mg đến 4,5x106 đvs/mg. Kết quả phân tích từ hàm T-test cho thấy P= 0,06. Sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê về độ sống của vắc xin BCG trên 2 loại ống này.
1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 Ống dùng vật liệu tạo vết khứa Ống có định vị bẻ đƣợc
Số lô đvs/mg
TB+2SD TB TB-2SD
65
Từ phân tích trên thể hiện quy trình sản xuất vắc xin BCG ổn định. Vắc xin chứa trong ống có định vị bẻ đƣợc so với ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa có kết quả độ sống tƣơng đƣơng nhau.
3.2.2.2. Chất lượng về độ ổn định nhiệt vắc xin BCG
Kết quả ổn định nhiệt của 60 lô vắc xin BCG đƣợc sản xuất trên ống có định vị bẻ đƣợc và 60 lô vắc xin dùng vật liệu tạo vết khứa, có độ ổn định nhiệt trung bình là 39,55% và 40,30%. Đồng thời kiểm định Pair sample T- test trong SPSS cho kết quả phân tích thống kê P = 0,47 với độ tin cậy 95%. Từ các dữ liệu trên cho thấy sự khác biệt về ổn định nhiệt của 2 loại ống không có ý nghĩa thống kê.
Hình 3.9. Kết quả ổn ịnh nhiệt của 2 loại ống chứa vắc xin
3.2.2.3. Chất lượng độ phân tán vắc xin BCG
Đánh giá kết quả độ phân tán của 60 lô trên ống dùng vật liệu tạo vết khứa (lô 428 đến 487) và 60 lô trên ống có định vị bẻ đƣợc (lô 488 đến lô 547) Kết quả thể hiện trong hình 3.10.
10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59
Ống dùng vật liệu tạo vết khứa Ống có định vị bẻ đƣợc (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
%
Số lô TB+2SD
TB-2SD TB
66
Hình 3.10. Kết quả ộ phân tán của 2 loại ống chứa vắc xin
Độ phân tán của vắc xin BCG trên ống có định vị bẻ đƣợc và ống dùng vật liệu tạo vết khứa có kết quả tƣơng đƣơng nhau, độ phân tán trung bình của vắc xin BCG trên ống dùng vật liệu tạo khứa là 1,316 và vắc xin BCG trong ống có định vị bẻ đƣợc là 1,336. Tất cả các lô đều ổn định và nằm trong giới hạn TB ± 2SD (từ 1,22 đến 1,43).
3.2.2.4. Chất lượng về độ chân không vắc xin BCG
Vắc xin BCG sau khi phân ống và đông khô sẽ đƣợc hàn kín bằng máy hàn chân không KUMABE ES 1500 (Nhật Bản). Kiểm tra chân không là kiểm tra độ kín của các ống sau khi hàn, trƣớc khi đƣa vào đóng gói và thành phẩm sau khi đóng gói. Độ kín của ống phải đƣợc duy trì đến hết vòng đời của sản phẩm.
Độ chân không vắc xin BCG đƣợc kiểm tra trên tất cả các lô, kết quả đƣợc phân tích trên 60 lô vắc xin đƣợc chứa trong ống 2ml có định vị bẻ đƣợc so với ống dùng vật liệu khứa để bẻ và đƣợc kiểm tra bằng máy Tesla coil (Nhật Bản). 1.000 1.100 1.200 1.300 1.400 1.500 1.600 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59
Ống dùng vật liệu tạo vết khứa Ống có định vị bẻ đƣợc
Số lô TB TB +2SD
67
Bảng 3.9. Kết quả kiểm tra chân không vắc xin BCG sau óng gói
Loại ống
Lô sản xuất (n=60)
Kết quả kiểm tra chân không vắc xin BCG thành phẩm Tiêu chuẩn Ống dùng vật liệu tạo vết khứa 428-487 Đạt 100% ống đạt chân không, các ống đƣợc kiểm tra phát ra ánh sáng tím đến trắng xanh khi kiểm tra bằng máy Tesla coil.
Ống có định vị bẻ
đƣợc 488-547 Đạt
Kết quả kiểm tra chân không tất cả các lô trên 2 loại ống chứa vắc xin đều đạt tiêu chuẩn 100%. Tất cả các ống đƣợc kiểm tra phát ra ánh sáng tím đến trắng xanh khi kiểm tra bằng máy Tesla coil.
Độ chân không của 2 loại ống có kết quả tƣơng đƣơng nhau.
3.2.2.5. Chất lượng độ ẩm tồn dư vắc xin BCG
Hình 3.11. Kết quả ộ ẩm tồn dƣ của vắc xin BCG tr n 2 loại ống
1.8 2 2.2 2.4 2.6 2.8 3 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 Ống dùng vật liệu khứa Ống có định vị bẻ đƣợc % Số lô TB+2SD TB-2SD TB
68
Theo hình 3.11 ta thấy: độ ẩm của 60 lô vắc xin BCG trên ống 2ml dùng vật liệu tạo vết khứa tƣơng đồng với kết quả của 60 lô vắc xin BCG đông khô trên ống có định vị bẻ đƣợc. Kết quả này ổn định và nằm trong tiêu chuẩn ≤ 3%. Sự khác biệt của độ ẩm tồn dƣ trên 2 loại ống này không có ý nghĩa thống kê với P = 0,168 khi phân tích kiểm định T-test với độ tin cậy 95%.
Kết quả so sánh các chỉ tiêu chất lƣợng của 60 lô vắc xin BCG sản xuất trên ống 2ml có định vị không khác biệt so với 60 lô vắc xin BCG sản xuất trƣớc đó (không có định vị bẻ đƣợc).
3.3. NGHIÊN CỨU TÍNH ỔN ĐỊNH CỦA VẮC XIN BCG TRONG ỐNG 2ML CÓ ĐỊNH VỊ BẺ ĐƢỢC 2ML CÓ ĐỊNH VỊ BẺ ĐƢỢC
Nghiên cứu tính ổn định của vắc xin để xác định tỉ lệ thay đổi độ sống (công hiệu) đƣợc cho là liên quan đến chất lƣợng của sản phẩm. Tính ổn định của vắc xin BCG đƣợc theo dõi trên 3 lô, mỗi lô tiến hành kiểm tra tại 3 thời điểm 6 tháng , 12 tháng và 18 tháng. Tại mỗi thời điểm, chúng tôi lặp lại mẫu 3 lần trên một lô. Kết quả trung bình tại mỗi thời điểm đƣợc lần lƣợt so sánh với kết quả sau đông khô.
3.3.1. Tính ổn ịnh ộ sống (công hiệu) của vắc xin BCG theo thời gian Bảng 3.10. Độ sống của vắc xin BCG theo thời gian
Thời gian Độ sống vắc xin BCG (x10 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
6
đvs/mg)
Lô: 488-10-20 Lô: 489-10-20 Lô: 490-10-20
Sau đông khô 4,22 3,96 3,52
06 tháng 4,10 3,90 3,43
12 tháng 3,81 3,63 3,21
18 tháng 3,65 3,29 2,99
Tiêu chuẩn 1 - 6
Theo bảng 3.10, vắc xin BCG ở nhiệt độ bảo quản (2-8o
C), sau 18 tháng độ sống của các lô vắc xin BCG 488-10-20, 489-10-20 và 490-10-20
69 lần lƣợt là: 3,65 x106
đvs/mg, 3,29 x106 đvs/mg và 2,99 x106 đvs/mg, đạt tiêu chuẩn theo DĐVN V, 2017.
Tuy vậy, so với độ sống sau đông khô tất cả các lô vắc xin đều có giảm nhẹ độ sống theo thời gian bảo quản. Tỷ lệ giảm độ sống của 3 lô vắc xin BCG 488-10-20, 489-10-20 và 490-10-20 đƣợc thể hiện ở hình 3.12.
Hình 3.12. Tỷ lệ giảm ộ sống vắc xin BCG theo thời gian
Kết quả độ sống của vắc xin BCG đến thời điểm 12 tháng cho thấy độ sống vắc xin BCG giảm 9-10%, phù hợp với vắc xin BCG đông khô [37].
Đến thời điểm 18 tháng, độ sống các lô giảm trung bình thấp nhất là 13,43% ở lô 488-10-20 và nhiều nhất ở lô 489-10-20 là 17,0%. Nghiên cứu này cho kết quả tƣơng tự với nghiên cứu tính ổn định vắc xin BCG của tác giả Huỳnh Thị Thanh Xuân ở ống dùng vật liệu tạo vết khứa để bẻ. Độ sống của vắc xin BCG giảm hằng năm khoảng 10% [24;40].
3.3.2. Tính ổn ịnh nhiệt của vắc xin BCG theo thời gian
Tính ổn định nhiệt của 3 lô vắc xin BCG 488-10-20, 489-10-20 và 490- 10-20 tại các thời điểm kiểm tra đƣợc thể hiện ở hình 3.13.
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
Sau đông khô 06 tháng 12 tháng 18 tháng
488-10-20 489-10-20 490-10-20
%
70
Hình 3.13. Kết quả ộ ổn ịnh nhiệt vắc xin BCG theo thời gian
Tính ổn định nhiệt của vắc xin BCG tăng dần khi độ sống vắc xin BCG giảm theo thời gian. Lô vắc xin BCG độ ổn định nhiệt trung bình tăng từ 39,28% sau đông khô lên 46,51 % sau 18 tháng. Kết quả cho thấy, độ ổn định nhiệt của vắc xin BCG cao hơn nhiều so với tiêu chuẩn là ≥ 20%.
3.3.3. Tính ổn ịnh v ti u chuẩn ộ ẩm ộ tồn dƣ
Bảng 3.11. Độ ẩm tồn dƣ của vắc xin BCG theo thời gian
Thời gian
Độ ẩm tồn dƣ vắc xin BCG theo thời gian (%) 488-10-20 489-10-20 490-10-20
Sau đông khô 2,09 2,35 2,41 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
06 tháng 2,21 2,57 2,41 12 tháng 2,41 2,49 2,17 18 tháng 2,28 2,32 2,29 Trung bình 2,25 2,43 2,32 Tiêu chuẩn ≤ 3% 20 25 30 35 40 45 50 55
Sau đông khô 06 tháng 12 tháng 18 tháng
488-10-20 489-10-20 490-10-20
%
71
Nghiên cứu cho thấy, độ ẩm tồn dƣ cao làm ảnh hƣởng đến cảm quan và độ ổn định về độ sống cũng giảm mạnh trong quá trình bảo quản (38).
Độ ẩm tồn dƣ của vắc xin BCG đƣợc sản xuất trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc đến 18 tháng có kết quả trung bình là 2,25%, 2,43% và 2,32% tƣơng ứng với lô 488-10-20, 489-10-20 và 490-10-20 và đều đạt tiêu chuẩn ≤ 3% theo dƣợc điển Việt Nam V, 2017. Độ ẩm tồn dƣ sau 18 tháng không có sự thay đổi so với kết quả ban đầu.
3.3.4. Tính ổn ịnh v ti u chuẩn chân không
Đối với vắc xin BCG đƣợc sản xuất trong ống có định vị bẻ đƣợc, phải theo dõi độ ổn định của ống trong suốt vòng đời của sản phẩm, và đƣợc đánh giá độ kín của ống bằng phƣơng pháp kiểm tra chân không.
Thực hiện kiểm tra chân không trên toàn bộ số ống 2ml có định vị bẻ đƣợc của lô vắc xin BCG sau hàn ống tại các thời điểm sau 6 tháng, 12 tháng và 18 tháng bảo quản ở nhiệt độ 2-8o
C.
Bảng 3.12. Kết quả kiểm tra chân không theo thời gian
Thời gian
Tỷ lệ loại bỏ chân không (%)
Lô: 488-10-20 Lô: 489-10-20 Lô: 490-10-20 Tiêu chuẩn Sau hàn ống (%) 4,07 3,48 3,56 ≤ 5% Sau 6 tháng (%) 0 0 0 0 Sau 12 tháng (%) 0 0 0 0 Sau 18 tháng (%) 0 0 0 0
Bảng 3.12 cho thấy, kết quả kiểm tra chân không của vắc xin BCG sản xuất trên ống 2 ml có định vị bẻ đƣợc sau 18 tháng bảo quản ở nhiệt độ 2 đến 8oC không phát hiện thêm ống nào không đạt chân không.
72
3.3.5. Tính ổn ịnh v các chỉ ti u tốc ộ tạo huy n dịch ồng nhất, cảm quan
Bảng 3.13. Tốc ộ tạo huy n dịch ồng nhất của vắc xin BCG theo thời gian
Thời gian
Tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất (giây) 488-10-20 489-10-20 490-10-20
Sau hàn ống 44 42 43
Sau 6 tháng 45 44 45
Sau 12 tháng 44 46 44
Sau 18 tháng 44 45 43
Tiêu chuẩn (giây) ≤ 60
* Kết quả kiểm tra tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất sau 6,12, 18 tháng bảo quản ở 2 đến 8oC của 3 lô vắc xin BCG đông khô nghiên cứu trên ống 2 ml có định vị bẻ đƣợc ổn định và đạt tiêu chuẩn.
* Kết quả kiểm tra dạng vật lý (cảm quan): tất cả các ống vắc xin BCG đông khô trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc sau 6, 12, 18 tháng đạt tiêu chuẩn: bột trắng, bong, không teo, không chứa tạp chất theo DĐVN V, 2017.
Tóm tắt:
Độ sống vắc xin BCG sau 18 tháng, giảm nhiều nhất là 17% và ít nhất là 13,43% so với thời điểm sau đông khô. Đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn xuất xƣởng về độ sống là 1– 6 x 106đvs/mg và cũng tƣơng đồng với kết quả nghiên cứu trƣớc đó ở ống 2ml dùng vật liệu tạo vết khứa. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Tính ổn định nhiệt của vắc xin BCG theo thời gian 18 tháng trung bình là 46,51% so với tiêu chuẩn xuất xƣởng ≥ 20%.
Kết quả nghiên cứu tính ổn định về dạng vật lý, độ ẩm tồn dƣ, tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất, tỷ lệ loại bỏ chân không cho thấy gần nhƣ không thay đổi sau 18 tháng bảo quản.
73
CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
4.1. KẾT LUẬN
4.1.1. Đã xác định đƣợc các thông số kỹ thuật cho ống thủy tinh 2 ml có định vị bẻ đƣợc hãng Schott, (theo bản vẽ số: 70000000300/00. Quality Certificate No: 0414/CA-QA/XI/15, mã số: 10000380905) với độ dày vòng sơn cổ 0,9±0,1 và lực bẻ 93,30 Newton. Phù hợp với trang thiết bị hiện có tại cơ sở sản xuất (IVAC).
4.1.2. Sản xuất (3lô) vắc xin BCG đông khô trên ống 2ml định vị bẻ đƣợc đạt chất lƣợng trên tất cả 13 tiêu chuẩn xuất xƣởng phù hợp khuyến cáo