KHÔ TRÊN ỐNG 2ML ĐỊNH VỊ BẺ ĐƢỢC.
Sau khi có kết quả chất lƣợng vắc xin BCG đƣợc sản xuất và đông khô trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc. Chúng tôi đã bƣớc đầu xác định đƣợc thông số kỹ thuật của ống 2ml sử dụng cho sản xuất và đông khô vắc xin BCG. Ống đƣợc thiết kế theo bản vẽ số: 70000000300/00. Quality Certificate No: 0414/CA-QA/XI/15, mã số: 10000380905.
Ba lô vắc xin BCG 488-10-20; 489-10-20; 490-10-20 với qui mô thƣờng qui (14.000 ống) đƣợc sản xuất thử nghiệm trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc. Thời gian sản xuất từ 24/2/2020 đến 9/3/2020.
Chất lƣợng của 3 lô vắc xin BCG 488-10-20; 489-10-20; 490-10-20 sau đông khô gồm 13 chỉ tiêu theo WHO/TRS 979, 2013 và DĐVN V, 2017 đƣợc thể hiện trong các mục sau:
3.2.1 Kết quả kiểm ịnh chất lƣợng vắc xin BCG tr n ống 2ml có ịnh vị bẻ ƣợc
3.2.1.1. Kết quả mật độ quang, độ phân tán
Mật độ quang, độ phân tán trung bình của 3 lô vắc xin BCG 488-10- 20; 489-10-20; 490-10-20 sau đông khô đƣợc thể hiện ở hình 3.4.
58
Hình 3.4. Mật ộ quang và ộ phân tán
Mật độ quang của vắc xin BCG là thử nghiệm đo tổng số vi khuẩn kể cả vi khuẩn chết trong vắc xin BCG, đƣợc thực hiện bằng máy quang phổ kế ở bƣớc sóng 490nm. Kết quả mật độ quang các lô vắc xin BCG đƣợc sản xuất trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc nằm trong tiêu chuẩn xuất xƣởng. Kết quả các mẫu kiểm tra trong 1 lô tƣơng đƣơng nhau, lô 489-10-21 có độ mật độ quang cao nhất là 0,183; lô 490-10-21 có mật độ quang thấp nhất 0,170 so với tiêu chuẩn ≤ 0,5. Mật độ quang của vắc xin BCG càng thấp, số vi khuẩn sống càng cao thì đây là một yếu tố tạo nên hiệu quả của vắc xin an toàn cho ngƣời sử dụng.
Độ phân tán (tiêu chuẩn ≥0,9) đƣợc tính dựa trên mật độ quang học đo ở bƣớc sóng 434nm và 630 nm. Độ phân tán thể hiện sự rời rạc của vi khuẩn, độ phân tán càng cao thì cho thấy độ kết dính vi khuẩn càng thấp đồng nghĩa vắc xin càng đƣợc an toàn.
Vắc xin BCG sau khi gặt, đƣợc nghiền tế bào vi khuẩn BCG để pha vắc xin với Glutamate Natri 1,5%. Giai đoạn nghiền tế bào ảnh hƣởng rất lớn đến độ phân tán. Sự dao động lớn về độ phân tán là nguyên nhân gây ra những sai số về đơn vị sống trong mỗi thử nghiệm xác định độ sống và cũng là nguyên nhân làm sai lệch kết quả công hiệu cho mỗi liều tiêm [38].
Kết quả độ phân tán các lô vắc xin BCG đều đạt yêu cầu và nằm trong tiêu chuẩn, lô 488-10-20 có độ phân tán thấp nhất 1,220; lô 490-10-20 có độ phân tán cao nhất là 1,270. Kết quả cho thấy, các lô vắc xin trên đều đạt tiêu chuẩn ≥ 0,9 theo DĐVN V, 2017. 0.178 0.183 0.17 1.22 1.25 1.27 0.9 0.95 1 1.05 1.1 1.15 1.2 1.25 1.3 1.35 1.4 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 488-10-21 489-10-21 490-10-21 Mật độ quang Độ phân tán
59
3.2.1.2. Kết quả độ sống, tỉ lệ sống sau đông khô và tỷ lệ ổn định nhiệt
Bảng 3.6. Kết quả ộ sống trung bình của 3 lô vắc xin BCG
Số lô SX Độ sống sau đông khô trung bình (x106đvs/mg)
488-10-20 4,22
489-10-20 3,96
490-10-20 3,52
Tiêu chuẩn 1 - 6
Độ sống vắc xin BCG là số lƣợng khuẩn lạc đếm đƣợc trên môi trƣờng khi nuôi cấy ở nhiệt độ 37oC /28 ngày.
Theo bảng 3.6. Kết quả độ sống trung bình 3 lô kiểm tra đều đạt tiêu chuẩn theo DĐVN V, 2017. Độ sống của 3 lô kiểm tra dao động từ 3,52 x106đvs/mg đến 4,22 x106đvs/mg (Tiêu chuẩn: 1-6 x106
đvs/mg).
Tỷ lệ sống và tỷ lệ ổn định nhiệt trung bình của 3 lô vắc xin BCG 488- 10-20; 489-10-20; 490-10-20 sau đông khô đƣợc thể hiện ở hình 3.5.
Hình 3.5. Tỉ lệ sống sau ông khô và ổn ịnh nhiệt vắc xin BCG
28.87 26.02 25.97 44.22 37.76 36.06 10 15 20 25 30 35 40 45 50 10 15 20 25 30 35 40 488-10-20 489-10-20 490-10-20
Tỉ lệ sống sau đông khô Tỉ lệ ổn định nhiệt
60
Tỉ lệ sống vắc xin BCG là tỉ lệ phần trăm số lƣợng vi khuẩn còn sống sót sau khi đông khô so với số lƣợng vi khuẩn trƣớc đông khô đƣợc thực hiện bằng phƣơng pháp đếm số lƣợng khuẩn lạc trên môi trƣờng Lowenstein Jensen.
Tỉ lệ ổn định nhiệt là độ sống của vắc xin BCG ủ ở nhiệt độ 37oC/28 ngày so với độ sống 4oC/28 ngày. Tỉ lệ sống của các lô vắc xin BCG sau đông khô các lô vắc xin có sự dao động từ 25,97% đến 28,74%. Tỉ lệ sống của vắc xin BCG sau đông khô so với độ sống trƣớc đông khô tại IVAC phải ≥ 10%. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Tỉ lệ ổn định nhiệt: kiểm tra độ sống vắc xin BCG sau khi ủ ở nhiệt độ 37oC/28 ngày so với độ sống vắc xin BCG ở 4oC/28 ngày phải đạt ≥ 20%. Các lô vắc xin BCG đƣa vào nghiên cứu có tính ổn định nhiệt cao trên 36%. Kết quả cao hơn nhiều so với tiêu chuẩn.
3.2.1.3. Kết quả độ ẩm tồn dư, tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất và cảm quan của vắc xin BCG trong ống 2ml có định vị bẻ được
Kết quả độ ẩm tồn dƣ, tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất và cảm quan của 3 lô vắc xin BCG 488-10-20; 489-10-20; 490-10-20 sau đông khô đƣợc thể hiện ở bảng 3.7.
Bảng 3.7. Kết quả ẩm ộ tồn dƣ, tốc ộ tạo huy n dịch ồng nhất, cảm quan của vắc xin BCG trong ống 2ml có ịnh vị bẻ ƣợc
Số lô SX Ẩm ộ tồn dƣ (%) Tốc ộ tạo huy n dịch ồng nhất (giây) Cảm quan 488-10-20 2,09 44 Đạt 489-10-20 2,35 42 Đạt 490-10-20 2,41 43 Đạt Ti u chuẩn ≤ 3 ≤ 60 Bột trắng, khô, bong, không chứa tạp chất
Bảng 3.7 cho thấy: Độ ẩm tồn dƣ của vắc xin BCG lô 488-10-20, 489- 10-20, 490-10-20 cho kết quả đạt trong tiêu chuẩn ≤ 3%, lô 490-10-20 có độ ẩm cao nhất 2,41%, lô 488-10-21 có độ ẩm thấp nhất 2,09%.
61
Độ ẩm tồn dƣ là lƣợng nƣớc liên kết không thể tách ra khỏi sản phẩm trong quá trình đông khô. Nếu tách đƣợc nƣớc này đòi hỏi chân không sâu hơn, nhiệt độ cao hơn quá trình đông khô và thời gian duy trì ít nhất 3 giờ.
Nhiều nghiên cứu cho thấy, độ ẩm tồn dƣ liên quan đến hoạt tính của vắc xin BCG. Độ ẩm cao ảnh hƣởng đến dạng vật lý, không đạt chuẩn về cảm quan, ảnh hƣởng đến tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất khi hoàn nguyên dẫn đến công hiệu của vắc xin cũng giảm mạnh trong quá trình bảo quản [39].
Tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất của 3 lô vắc xin đều đạt từ 42-44 giây và nằm trong tiêu chuẩn ≤ 60 giây.
Cảm quan: đƣợc kiểm tra trên tất cả các ống vắc xin BCG đông khô, loại bỏ các ống thừa, thiếu liều, ống không, ống bể vỡ, đầu xấu. Các ống đƣợc kiểm tra đều đạt tiêu chuẩn: có dạng bột trắng, khô, bong, không chứa tạp chất.
3.2.1.4. Kết quả chân không, vô khuẩn, nhận dạng, phản ứng da của 3 lô vắc xin BCG sản xuất trên ống 2ml có định vị bẻ được
Bảng 3.8. Kết quả chân không, vô khuẩn, nhận dạng vắc xin BCG tr n ống 2ml có ịnh vị bẻ ƣợc
Số lô SX Chân không Vô khuẩn Nhận dạng Phản ứng
da 488-10-20 4,07 Không phát hiện Đạt Đạt 489-10-20 3,48 Không phát hiện Đạt Đạt 490-10-20 3,56 Không phát hiện Đạt Đạt Tiêu chuẩn Các ống đạt chân không là ống phát ra ánh sáng tím đến trắng xanh
khi kiểm tra bằng máy Tesla coil. (≤ 5%) Không có sự phát triển của vi sinh vật sau 14 ngày theo dõi. Khuẩn lạc khô, xù xì màu trắng hoặc ngà vàng (trên môi trƣờng Lowenstein Jensen). Trực khuẩn hình que, mảnh, chịu acid điển hình bắt màu đỏ trên nền xanh (nhuộm Ziehl-Neelsen). Kích thƣớc của phản ứng tại chỗ phải tƣơng đƣơng với vắc xin mẫu chuẩn có cùng độ pha
62
Các ống vắc xin BCG khi đƣợc đông khô, chúng đƣợc hàn kín trên máy hàn chân không KUMABE ES-1500. Kiểm tra độ chân không là kiểm tra độ kín của các ống vắc xin BCG, các ống sau khi hàn kín đƣợc kiểm tra 100% trên máy kiểm tra chân không Tesla Coil. Kết quả kiểm tra chân không tất cả các ống vắc xin sau đông khô đạt tiêu chuẩn ≤ 5% trƣớc khi đóng gói theo DĐVN V, 2017.
Kiểm tra vô khuẩn vắc xin BCG kết quả tất cả các lô vắc xin đƣợc kiểm tra đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn WHO, TRS 979, 2013 và DĐVN V, 2017.
Nhận dạng và phản ứng da của vắc xin BCG cho thấy kết quả đạt yêu cầu theo WHO, TRS 979, 2013.
3.2.1.5. Kết quả an toàn Kiểm tra an toàn đặc hiệu Kiểm tra an toàn đặc hiệu
Kiểm tra an toàn đặc hiệu là kiểm tra xác định không có sự xuất hiện của Mycobacterium độc, đƣợc đánh giá thông qua theo dõi tình trạng sức khỏe của chuột lang trong suốt thời kỳ thử nghiệm và kết quả khám xét chuột để phát hiện tình trạng bệnh lý nhiễm lao của chuột thử nghiệm.
Tất cả chuột lang sau khi tiêm vắc xin BCG đều sống, khỏe mạnh, tăng cân (hình 3.6) và không có dấu hiệu của lao tiến triển. Nhƣ vậy vắc xin BCG lô 488-10-20; 489-10-20, 490-10-20 đều đạt yêu cầu về an toàn đặc hiệu theo tiêu chuẩn WHO/TRS 979, 2013 và DĐVN V, 2017.
Hình 3.6. Tỉ lệ tăng trọng lƣợng chuột lang theo thời gian
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 T1 T2 T3 T4 T5 T6 488-10-20 489-10-20 490-10-20 Tuần %
63
An toàn chung
Một mẫu an toàn chung đƣợc thực hiện tiêm trên 5 chuột nhắt trắng khỏe mạnh, trọng lƣợng 17-22g/con. Chuột đƣợc cân trƣớc trƣớc khi kiểm tra, cân sau 3 ngày và sau 7 ngày. Kết quả trọng lƣợng chuột nhắt trong thử nghiệm an toàn chung đƣợc thể hiện ở Hình 3.7.
Hình 3.7. Trọng lƣợng chuột nhắt theo thời gian
Theo hình 3.7 cho thấy trọng lƣợng chuột nhắt của cả 3 lô vắc xin BCG khỏe mạnh, lên cân sau 7 ngày theo dõi. Các lô vắc xin BCG 488-10-20; 489- 10-20, 490-10-20 đều đạt yêu cầu về an toàn chung theo tiêu chuẩn WHO/TRS 979, 2013 và DĐVN V, 2017. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Qua 13 chỉ tiêu chất lƣợng đƣợc kiểm tra, cả 3 lô vắc xin BCG 488-10- 20, 489-10-20 và 490-10-20 sản xuất thử nghiệm trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc với độ dày vòng sơn cổ 0,9±0,1mm, lực bẻ 93,30N là phù hợp với dây chuyền công nghệ sản xuất và đạt tiêu chuẩn chất lƣợng đăng ký (Dƣợc điển Việt Nam V, 2017 và WHO TRS 979, 2013).
10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 T0 T3 T7 488-10-20 489-10-20 490-10-20 Thời gian gram
64
3.2.2. Giám sát chất lƣợng vắc xin BCG sản xuất tr n ống 2ml có ịnh vị bẻ ƣợc
Lô vắc xin BCG 488-10-20 là lô vắc xin đầu tiên chứa trong ống 2ml có định vị bẻ đƣợc không dùng vật liệu tạo vết khứa. Đến tháng 12/2021, IVAC đã sản xuất đƣợc 60 lô vắc xin BCG trên ống có định vị bẻ đƣợc, tƣơng đƣơng 9.600.000 liều. Kết quả kiểm định chất lƣợng tại IVAC và Viện kiểm định quốc gia đạt tiêu chuẩn đăng ký, đủ điều kiện xuất xƣởng.
Chất lƣợng của vắc xin BCG sản xuất trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc giám sát thông qua theo dõi các chỉ tiêu chất lƣợng trên biểu đồ Shewhat chat có so sánh với số liệu kiểm định của các lô vắc xin BCG sản xuất trƣớc đó (trên ống không có định vị bẻ đƣợc). Kết quả so sánh trên 60 lô vắc xin BCG mỗi loại đƣợc trình bày dƣới đây:
3.2.2.1. Chất lượng về độ sống vắc xin BCG
Hình 3.8. Kết quả ộ sống của vắc xin BCG 2 loại ống chứa vắc xin
Theo hình 3.8 độ sống của vắc xin BCG đƣợc sản xuất trên 2 loại ống có định vị bẻ đƣợc và ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa có kết quả ổn định và nằm trong khoảng TB ± 2SD, độ sống dao động từ 2,5 x106đvs/mg đến 4,5x106 đvs/mg. Kết quả phân tích từ hàm T-test cho thấy P= 0,06. Sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê về độ sống của vắc xin BCG trên 2 loại ống này.
1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 Ống dùng vật liệu tạo vết khứa Ống có định vị bẻ đƣợc
Số lô đvs/mg
TB+2SD TB TB-2SD
65
Từ phân tích trên thể hiện quy trình sản xuất vắc xin BCG ổn định. Vắc xin chứa trong ống có định vị bẻ đƣợc so với ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa có kết quả độ sống tƣơng đƣơng nhau.
3.2.2.2. Chất lượng về độ ổn định nhiệt vắc xin BCG
Kết quả ổn định nhiệt của 60 lô vắc xin BCG đƣợc sản xuất trên ống có định vị bẻ đƣợc và 60 lô vắc xin dùng vật liệu tạo vết khứa, có độ ổn định nhiệt trung bình là 39,55% và 40,30%. Đồng thời kiểm định Pair sample T- test trong SPSS cho kết quả phân tích thống kê P = 0,47 với độ tin cậy 95%. Từ các dữ liệu trên cho thấy sự khác biệt về ổn định nhiệt của 2 loại ống không có ý nghĩa thống kê.
Hình 3.9. Kết quả ổn ịnh nhiệt của 2 loại ống chứa vắc xin
3.2.2.3. Chất lượng độ phân tán vắc xin BCG
Đánh giá kết quả độ phân tán của 60 lô trên ống dùng vật liệu tạo vết khứa (lô 428 đến 487) và 60 lô trên ống có định vị bẻ đƣợc (lô 488 đến lô 547) Kết quả thể hiện trong hình 3.10.
10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59
Ống dùng vật liệu tạo vết khứa Ống có định vị bẻ đƣợc
%
Số lô TB+2SD
TB-2SD TB
66
Hình 3.10. Kết quả ộ phân tán của 2 loại ống chứa vắc xin
Độ phân tán của vắc xin BCG trên ống có định vị bẻ đƣợc và ống dùng vật liệu tạo vết khứa có kết quả tƣơng đƣơng nhau, độ phân tán trung bình của vắc xin BCG trên ống dùng vật liệu tạo khứa là 1,316 và vắc xin BCG trong ống có định vị bẻ đƣợc là 1,336. Tất cả các lô đều ổn định và nằm trong giới hạn TB ± 2SD (từ 1,22 đến 1,43).
3.2.2.4. Chất lượng về độ chân không vắc xin BCG
Vắc xin BCG sau khi phân ống và đông khô sẽ đƣợc hàn kín bằng máy hàn chân không KUMABE ES 1500 (Nhật Bản). Kiểm tra chân không là kiểm tra độ kín của các ống sau khi hàn, trƣớc khi đƣa vào đóng gói và thành phẩm sau khi đóng gói. Độ kín của ống phải đƣợc duy trì đến hết vòng đời của sản phẩm.
Độ chân không vắc xin BCG đƣợc kiểm tra trên tất cả các lô, kết quả đƣợc phân tích trên 60 lô vắc xin đƣợc chứa trong ống 2ml có định vị bẻ đƣợc so với ống dùng vật liệu khứa để bẻ và đƣợc kiểm tra bằng máy Tesla coil (Nhật Bản). 1.000 1.100 1.200 1.300 1.400 1.500 1.600 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Ống dùng vật liệu tạo vết khứa Ống có định vị bẻ đƣợc
Số lô TB TB +2SD
67
Bảng 3.9. Kết quả kiểm tra chân không vắc xin BCG sau óng gói
Loại ống
Lô sản xuất (n=60)