3.1.1. Kết quả l a chọn loại ống 2ml có ịnh vị bẻ ƣợc phù hợp
3.1.1.1. Kết quả đánh giá các loại ống 2 ml có định vị bẻ được do nhà cung cấp giới thiệu
Bảng 3.1. Kết quả ánh giá 5 loại ống 2 ml có ịnh vị bẻ ƣợc
Chỉ tiêu kiểm tra Các loại mẫu ống đƣợc giới thiệu (n = 2000 ống)
1 2 3 4 5
Loại ống thủy tinh OPC OPC CBR CBR CBR
1. Cảm quan (*) Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt 2. Tỷ lệ bể vỡ giai đoạn vận chuyển 18,6% 0% 0% 0% 0% 3. Đƣờng kính bầu trên d3 (mm) KTH 7,5 / / / Kích thƣớc về độ dày vòng sơn cổ (mm) KTH KTH 1,2 1,1 0,9± 0,1 4. Tỷ lệ loại bỏ khi dùng thử trên thiết bị hiện có KTH KTH 26,54% 18,32% 4,5% 5. Tỷ lệ bẻ thành công sau khi hàn ống Lực bẻ KTH KTH KTH KTH 100% 93,30N 6. Chất lƣợng nguyên liệu đầu (ống 2ml) KTH KTH KTH KTH Đạt
(*): Kiểm tra các chỉ tiêu: hình dạng, màu sắc, độ trong KTH: Không thực hiện
50 Bảng 3.1 cho thấy:
- Mẫu số 1: Ống có cứa sẵn (ống OPC) không đáp ứng đƣợc yêu cầu kỹ thuật, ngay trong quá trình vận chuyển đã bị gãy nhiều tại vị trí cứa sẵn (18,6%).
- Mẫu số 2: Ống có cứa sẵn (ống OPC) không đạt tiêu chuẩn kỹ thuật do đƣờng kính bầu trên (d3 = 7,5 mm) lớn hơn so với tiêu chuẩn là 7,0 ± 0,4 mm.
- Mẫu số 3: Ống có vòng sơn quanh cổ (ống CBR) đạt các yêu cầu về cảm quan, không gãy vỡ do vận chuyển, các thông số kỹ thuật phù hợp với các thiết bị hiện có. Tuy nhiên tỷ lệ loại bỏ của loại ống này trong quá trình thử nghiệm là 26,54%, tỷ lệ này quá cao so với tiêu chuẩn là ≤7%, không thể sử dụng đƣợc.
- Mẫu số 4: Ống có vòng sơn quanh cổ (ống CBR) đã đƣợc điều chỉnh lực bẻ so với mẫu số 3. Tỷ lệ loại bỏ chân không qua các thử nghiệm là 18,32%, tỷ lệ này còn cao so với tiêu chuẩn là ≤ 7%.
- Mẫu số 5: Ống có vòng sơn quanh cổ (ống CBR) mẫu số 5, đƣợc điều chỉnh lực bẻ bằng cách thay đổi kích thƣớc độ dày vòng sơn cổ là 0,9 ± 0,1mm. Bƣớc đầu xác định ống có định vị bẻ đƣợc phù hợp với các chỉ tiêu kiểm tra. Chúng tôi tiến hành đánh giá chất lƣợng theo tiêu chuẩn ở các bƣớc tiếp theo.
3.1.1.2. Kết quả xác định thông số kỹ thuật của loại ống 2 ml có định vị bẻ được vị bẻ được
Sau khi đánh giá sơ bộ 5 loại ống do nhà cung cấp giới thiệu, bƣớc đầu cho thấy mẫu ống số 5 đạt các tiêu chí do IVAC yêu cầu do đó chúng tôi đặt hàng mẫu ống số 5 để đo đạc các thông số kỹ thuật, đánh giá chất lƣợng của loại ống này và đặt tên là ống 2ml có định vị bẻ đƣợc.
51
Bảng 3.2. So sánh các thông số kỹ thuật của 2 loại ống 2ml có ịnh vị bẻ ƣợc và ống 2ml ang sử dụng vật liệu khứa hiện nay (n = 20)
Tiêu chí kiểm tra
Loại ống Tiêu chuẩn Không có định vị bẻ đƣợc Có định vị bẻ đƣợc Tổng chiều cao (h1) 92,5 mm 92,2 mm 92.5 ± 1,0 mm Chiều cao bầu chứa (h4) 39,8 – 39,9
mm 39,0 – 39,1 mm 40,0 ± 1,0 mm Đƣờng kính thân (d1) 11,1 mm 11,1 mm 11,0 ± 0,25 mm Đƣờng kính cổ (d2) 5,5 – 5,6 mm 5,6 mm 5,5 ± 0,5 mm Đƣờng kính bầu trên (d3) 7,0 – 7,1mm 7,0 – 7,1mm 7,0 ± 0,4 mm Đƣờng kính miệng (d7) 5,7 – 5,8mm 5,5 – 5,8 mm 5,5 ± 0,3 mm Độ dày vòng sơn cổ / 0,9 ± 0,1 mm 0,9 ± 0,2 mm Với các tiêu chuẩn kỹ thuật trên (bảng 3.2) cho ta thấy kết quả các thông số gồm: tổng chiều cao, chiều cao bầu chứa, đƣờng kính thân, đƣờng kính bầu trên của ống 2ml có định vị bẻ đƣợc tƣơng đồng với ống 2ml đang sử dụng hiện nay.
Đối với đƣờng kính cổ (d2): nếu nhỏ quá thì trong quá trình phân ống bằng Syringe Cornwall vắc xin sẽ bị dính trên cổ ống, lớn quá thì không đƣa vào máy súc rửa đƣợc, do đó ở tiêu chuẩn này đòi hỏi phải có sự chính xác theo tiêu chuẩn của thiết bị sử dụng.
Độ dày của vòng sơn cổ ảnh hƣởng đến tỉ lệ bể vỡ của ống, nếu vòng sơn quá dày, dễ bẻ do đó cũng rất dễ gẫy qua quá trình vận chuyển và ngƣợc lại.
Qua quá trình trao đổi và nghiên cứu chúng tôi đã xác định đƣợc ống 2ml có định vị bẻ đƣợc đạt tiêu chuẩn, có thông số kỹ thuật tƣơng đồng với ống đang sử dụng hiện nay.
52
Kết quả kiểm tra chất lƣợng của ống 2ml có định vị bẻ đƣợc.
Kiểm tra chất lƣợng của 2 loại ống về các chỉ tiêu cảm quan, độ trung tính, độ lóc thủy tinh và kim loại nặng tại phòng Kiểm định cho thấy ống 2ml có định vị bẻ đƣợc đạt chỉ tiêu chất lƣợng theo tiêu chuẩn nguyên liệu đầu, tƣơng đƣơng với loại ống không có định vị bẻ đƣợc đã dùng. Phiếu trả lời kết quả số KĐ: 01-19/NLĐ-NB đạt yêu cầu.
Kết quả đánh giá sự phù hợp trên các thiết bị hiện có: Sự phù hợp của loại ống 2ml có định vị bẻ đƣợc đƣợc đánh giá thông qua tỷ lệ loại bỏ trong quá trình sử dụng trên các thiết bị hiện có gồm các giai đoạn súc rửa, phân liều, hàn ống và tỷ lệ loại bỏ chân không sau khi hàn ống.
Bảng 3.3. Tỷ lệ loại bỏ của ống 2 ml có ịnh vị bẻ ƣợc trong quá trình sử dụng thử Chỉ tiêu đánh giá Số lƣợng ống đƣợc đánh giá Tỷ lệ loại bỏ Tiêu chuẩn (%) Số ống loại Tỷ lệ (%) 1
Loại bỏ trong quá trình thử nghiệm trên các thiết bị hiện có của IVAC: máy súc rửa Bausch+Strolbel, syringe Cornwall, máy hàn chân không Kumabe ES-1500.
515 15 2,9 ≤ 5
2 Loại bỏ chân không sau khi
hàn ống. 500 8 1,6 ≤ 2
53
Nhƣ vậy thông qua việc sử dụng thử trên các thiết bị hiện có, ống 2 ml có định vị bẻ đƣợc của hãng Schott hoàn toàn phù hợp với các thiết bị nhƣ máy súc rửa Bausch+Strobel, phân ống bằng syringe Cornwall, hàn ống bằng máy hàn chân không KUMABE thể hiện bằng tổng tỷ lệ loại bỏ là 4,5% (bảng 3.3) đạt tiêu chuẩn (TC < 7%).
Xác định tỷ lệ thành công khi bẻ ống.
Tiến hành đánh giá tỷ lệ bẻ thành công bằng cách bẻ thử 500 ống 2 ml có định vị bẻ đƣợc của hãng Schott. Kết quả bẻ thử ống 2ml có định vị bẻ đƣợc cho cả 2 giới tính (nam và nữ ) đều đạt yêu cầu. Tỉ lệ bẻ thành công đạt 100%. Tuy nhiên, số lƣợng ống khó bẻ (bẻ cứng) là 1/500 ống chiếm tỉ lệ 0,2%.
Lực bẻ của ống 2ml có đinh vị bẻ đƣợc phụ thuộc vào vòng sơn cổ, nếu vòng sơn cổ dày thì lực bẻ càng nhẹ, dẫn đến tỉ lệ loại bỏ càng lớn và ngƣợc lại. Sau quá trình nghiên cứu chúng tôi phối hợp và trao đổi với nhà sản xuất đƣa ra một lực bẻ phù hợp. Lực Newton của ống 2ml có định vị bẻ đƣợc đƣợc nhà sản xuất khảo sát và đƣa ra là 93,30 N.
3.1.2. Kết quả ông khô thử nghiệm vắc xin BCG tr n ống 2ml ã xác ịnh thông số kỹ thuật
3.1.2.1. Kết quả kiểm tra chất lượng vắc xin BCG
Kiểm tra chất lƣợng 6 lô vắc xin BCG đông khô thử nghiệm trên ống 2 ml có định vị bẻ đƣợc, đánh giá kết quả kiểm định theo các tiêu chuẩn xuất xƣởng gồm: Kết quả độ sống sau đông khô, tỉ lệ ổn định nhiệt, độ ẩm tồn dƣ, an toàn đặc hiệu, an toàn chung, vô khuẩn, cảm quan, chân không, mật độ quang, độ phân tán, tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất.
Kết quả đƣợc so sánh với 6 lô vắc xin đông khô trên ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa để bẻ.
54
Hình 3.1. Độ sống 2 loại ống Hình 3.2. Ổn ịnh nhiệt 2 loại ống
Kết quả độ sống và ổn định nhiệt của vắc xin chứa trên 2 loại ống, phân tích thống kê cho thấy giá trị P độ sống: 0,53 và giá trị P- value ổn đinh nhiệt: 0,073, với độ tin cậy 95%. Từ số liệu hình 3.1 và hình 3.2 cho thấy, sự khác biệt 2 chỉ tiêu độ sống và ổn định nhiệt của vắc xin BCG trên 2 loại ống này không có ý nghĩa thống kê.
Kết quả kiểm tra độ ẩm tồn dƣ sau đông khô
Hình 3.3. Kết quả ộ ẩm tồn dƣ tr n 2 loại ống nghi n cứu
1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 Ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa để bẻ. Ống có định vị bẻ đƣợc đvs/mg 3,65 4,12 P= 0,53 20 25 30 35 40 45 50 Ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa để bẻ. Ống có định vị bẻ đƣợc 41,89% 36.11% % P= 0,073 1.5 2 2.5 3
Ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa để bẻ Ống có định vị bẻ đƣợc
Độ ẩm tồn dƣ trung bình
2,73% 2,66%
%
55
Theo hình 3.3 ta thấy độ ẩm tồn dƣ của các lô vắc xin đông khô trên ống 2 ml có định vị bẻ đƣợc và ống 2 ml sử dụng vật liệu tạo vết khứa đều đạt yêu cầu.
Độ ẩm tồn dƣ trung bình của ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa là 2,73% và của ống 2 ml có định vị bẻ đƣợc là 2,67%. Sự khác biệt về độ ẩm tồn dƣ của vắc xin sử dụng trên 2 loại ống là không có ý nghĩa thống kê với P = 0,399 và độ tin cậy 95%.
Kết quả kiểm tra cảm quan (dạng vật lý)
Kiểm tra cảm quan trên tất cả các ống vắc xin BCG đông khô, các ống đƣợc kiểm tra đều đạt tiêu chuẩn: có dạng bột trắng, khô, bong, không chứa tạp chất.
Kết quả kiểm tra vô khuẩn
Vắc xin BCG đƣợc thực hiện trên môi trƣờng Thioglycolate để kiểm tra sự có mặt của vi khuẩn hiếu, kỵ khí và môi trƣờng TSB để kiểm tra sự có mặt của nấm, vi khuẩn hiếu khí. Vắc xin đƣợc cấy trực tiếp vào môi trƣờng nuôi cấy, sau đó mang đi ủ trong tủ ấm ở nhiệt độ 30-35oC đối với môi trƣờng Thioglycolate và 20-25oC đối với môi trƣờng TSB.
Kết quả kiểm tra: các mẫu đều không phát hiện vi sinh vật sau 14 ngày theo dõi.
Kết quả kiểm tra an toàn đặc hiệu
An toàn đặc hiệu của mẫu vắc xin BCG đông khô trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc thực hiện trên chuột lang. Kết quả cho thấy: tổng số chuột thử nghiệm đều tăng cân và không có biểu hiện bệnh lý sau 6 tuần theo dõi.
Kết quả kiểm tra an toàn chung
Vắc xin BCG đông khô trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc đƣợc kiểm tra an toàn chung trên chuột nhắt trắng, tiêm dƣới da lƣng 1mg/1ml/con. Kết quả: tổng số chuột thử nghiệm đều tăng cân và không có biểu hiện bệnh lý sau 7 ngày theo dõi.
Kết quả kiểm tra các chỉ tiêu khác: mật độ quang, độ phân tán, tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất
56
Bảng 3.4. Kết quả v mật ộ quang, ộ phân tán, tốc ộ tạo huy n dịch ồng nhất của ống 2 ml có ịnh vị bẻ ƣợc Chỉ ti u Ti u chuẩn Lô thử nghiệm TN1 TN2 TN3 TN4 TN5 TN6 TB Mật độ quang 0,5 0,177 0,168 0,165 0,177 0,175 0,166 0,171 Độ phân tán 0,9 1,22 1,22 1,27 1,16 1,14 1,22 1,21 Tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất (giây) ≤ 60 45 47 45 44 44 45 45
Kết quả bảng 3.4 cho thấy: Mật độ quang trung bình tất cả các lô thử nghiệm đông khô trên ống tiêm 2 ml có định vị bẻ đƣợc của hãng Schott đều đạt tiêu chuẩn, độ phân tán trung bình là 1,21 và tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất trung bình là 45 giây, đều đạt yêu cầu so với tiêu chuẩn xuất xƣởng.
Các chỉ tiêu kiểm tra chất lƣợng vắc xin BCG trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc đạt tiêu chuẩn xuất xƣởng và tƣơng đƣơng với ống 2ml sử dụng vật liệu tạo vết khứa để bẻ.
3.1.2.2. Kết quả thống kê tỷ lệ loại bỏ trong quá trình sản xuất
Bảng 3.5. Tổng hợp tỷ lệ loại bỏ của vắc xin sử dụng 2 loại ống trong suốt quá trình sản xuất
Loại ống tiêm Tỷ lệ loại bỏ trung bình (%) Gãy, vỡ khi súc rửa, chuẩn bị Vật lý khi hàn Vật lý giai đoạn đóng gói Loại chân không Tổng tỷ lệ loại bỏ Ống 2ml đang sử dụng hiện nay 0,98 0,50 0,45 4,41 6,34 Ống 2ml có định vị bẻ đƣợc mẫu số 5 1,20 0,70 0,83 5,00 7,73 Ch nh lệch 0,22 0,20 0,38 0,59 1,39
57
Tổng tỷ lệ loại bỏ trong suốt quá trình sản xuất của vắc xin đông khô trên ống tiêm 2 ml có định vị bẻ đƣợc của hãng Schott là 7,73%, trong khi đó của ống tiêm 2 ml, màu nâu, sử dụng vật liệu tạo vết khứa hiện nay là 6,34%. Tỷ lệ loại bỏ của ống 2ml có mẫu định vị bẻ đƣợc cao hơn so với ống tiêm sử dụng vật liệu khứa để bẻ là 1,39%, và tỷ lệ này là chấp nhận đƣợc đối với ống chứa thuốc tiêm bẻ đƣợc.
Một số tiêu chuẩn chất lƣợng chính vắc xin BCG đông khô trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc có kết quả tƣơng đồng với vắc xin BCG đông khô trên ống 2ml dùng vật liệu tạo vết khứa và đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn của TCYTTG (WHO.TRS 979, 2013) và dƣợc điển Việt Nam V, 2017.
3.2. KẾT QUẢ SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM 3 LÔ VẮC XIN BCG ĐÔNG KHÔ TRÊN ỐNG 2ML ĐỊNH VỊ BẺ ĐƢỢC. KHÔ TRÊN ỐNG 2ML ĐỊNH VỊ BẺ ĐƢỢC.
Sau khi có kết quả chất lƣợng vắc xin BCG đƣợc sản xuất và đông khô trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc. Chúng tôi đã bƣớc đầu xác định đƣợc thông số kỹ thuật của ống 2ml sử dụng cho sản xuất và đông khô vắc xin BCG. Ống đƣợc thiết kế theo bản vẽ số: 70000000300/00. Quality Certificate No: 0414/CA-QA/XI/15, mã số: 10000380905.
Ba lô vắc xin BCG 488-10-20; 489-10-20; 490-10-20 với qui mô thƣờng qui (14.000 ống) đƣợc sản xuất thử nghiệm trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc. Thời gian sản xuất từ 24/2/2020 đến 9/3/2020.
Chất lƣợng của 3 lô vắc xin BCG 488-10-20; 489-10-20; 490-10-20 sau đông khô gồm 13 chỉ tiêu theo WHO/TRS 979, 2013 và DĐVN V, 2017 đƣợc thể hiện trong các mục sau:
3.2.1 Kết quả kiểm ịnh chất lƣợng vắc xin BCG tr n ống 2ml có ịnh vị bẻ ƣợc
3.2.1.1. Kết quả mật độ quang, độ phân tán
Mật độ quang, độ phân tán trung bình của 3 lô vắc xin BCG 488-10- 20; 489-10-20; 490-10-20 sau đông khô đƣợc thể hiện ở hình 3.4.
58
Hình 3.4. Mật ộ quang và ộ phân tán
Mật độ quang của vắc xin BCG là thử nghiệm đo tổng số vi khuẩn kể cả vi khuẩn chết trong vắc xin BCG, đƣợc thực hiện bằng máy quang phổ kế ở bƣớc sóng 490nm. Kết quả mật độ quang các lô vắc xin BCG đƣợc sản xuất trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc nằm trong tiêu chuẩn xuất xƣởng. Kết quả các mẫu kiểm tra trong 1 lô tƣơng đƣơng nhau, lô 489-10-21 có độ mật độ quang cao nhất là 0,183; lô 490-10-21 có mật độ quang thấp nhất 0,170 so với tiêu chuẩn ≤ 0,5. Mật độ quang của vắc xin BCG càng thấp, số vi khuẩn sống càng cao thì đây là một yếu tố tạo nên hiệu quả của vắc xin an toàn cho ngƣời sử dụng.
Độ phân tán (tiêu chuẩn ≥0,9) đƣợc tính dựa trên mật độ quang học đo ở bƣớc sóng 434nm và 630 nm. Độ phân tán thể hiện sự rời rạc của vi khuẩn, độ phân tán càng cao thì cho thấy độ kết dính vi khuẩn càng thấp đồng nghĩa vắc xin càng đƣợc an toàn.
Vắc xin BCG sau khi gặt, đƣợc nghiền tế bào vi khuẩn BCG để pha vắc xin với Glutamate Natri 1,5%. Giai đoạn nghiền tế bào ảnh hƣởng rất lớn đến độ phân tán. Sự dao động lớn về độ phân tán là nguyên nhân gây ra những sai số về đơn vị sống trong mỗi thử nghiệm xác định độ sống và cũng là nguyên