Bảng 1.3: So sánh phương pháp IHC và FISH
IHC FISH
Dễ thực hiện, nhanh, rẻ
tiển.
Kinh phí khơng quá mắc.
Xác định được mơ học trên tiêu bản.
Cĩ thể lưu trữ trong thời gian dài.
Quá trình xử lý mơ khắt khe (vì protein dễ bị hư khi xử
lý).
Đánh giá kết quả chủ quan và bán định lượng.
Khĩ thực hiện, đắt tiền, tốn thời gian hơn.
Kinh phí cao, cần trang bị kính hiển vi huỳnh quang.
Khĩ xác định được vùng carcinơm xâm nhập.
Các tín hiệu huỳnh quang sẽ bị
hủy theo thời gian.
DNA bền hơn protein nên điều kiện xử lý mơ ít khắt khe hơn.
Cách tính điểm khách quan và
CHƯƠNG 2
VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP
2.1 ĐỊA ĐIỂM THỰC HIỆN ĐỀ TÀI
Đề tài được thực hiện tại phịng Xét nghiệm Sinh học Phân tử thuộc khoa Giải Phẩu Bệnh – Bệnh viện Ung Bướu Tp. HCM.
2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
300 trường hợp ung thư vú xâm lấn đã được chẩn đốn và nhuộm HE và đánh dấu vùng ung thư xâm lấn tại khoa Giải phẫu bệnh – Bệnh viện Ung Bướu Tp. HCM từ tháng 01/2010 đến 05/2011.
2.3 TIÊU CHUẨN CHỌN MẪU
Đểđáp ứng được đề tài “Khảo sát sự biểu hiện của HER2 bằng phương pháp hĩa mơ miễn dịch và lai tại chỗ gắn huỳnh quang”, chúng tơi đã đưa ra tiêu chuẩn chọn mẫu như sau:
– Mẫu bệnh phẩm được cố định ngay trong dung dịch formol 10% đệm trung tính từ 6 giờ đến 48 giờ.
– Mẫu mơ đã được chẩn đốn trên tiêu bản nhuộm Haematoxylin và Eosin là carcinơm xâm lấn.
– Bệnh nhân khơng hĩa trị trị, xạ trị trước đĩ.
– Các đối tượng nghiên cứu phải cĩ kết quả chẩn đốn lâm sàng, Giải phẫu bệnh, kết quả nhuộm hĩa mơ miễn dịch ER, PR.
2.4 TIÊU CHUẨN LOẠI TRỪ
Khơng thỏa một tiêu chuẩn chọn mẫu nào bất kỳ. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2.5. CÁCH TÍNH CỠ MẪU:
n = [t2p(1-p)]/d2 Trong đĩ: n là cỡ mẫu
p = 19% (tỷ lệ khuếch đại gen trong nghiên cứu của Garcia- Caballero T.)
t = 1,96 với độ tin cậy 95% d = 0,05 (sai số cho phép 5%) => n = 236
2.6 CÁCH LẤY BỆNH PHẨM VÀ XỬ LÝ BỆNH PHẨM
2.6.1 Cốđịnh mơ
Bệnh phẩm được cốđịnh ngay trong dung dịch formol 10% đệm pH trung tính trong 6 giờ - 48 giờ.
2.6.2 Cắt lọc
Bệnh phẩm được cắt lọc theo những quy định sau:
– Tuyến vú: cắt 3 mẫu ở mơ bướu
– Núm vú
– Cân cơ ngực ngay dưới da
– Hạch nhĩm I
– Hạch nhĩm II
– Hạch nhĩm III
2.6.3 Xử lý mơ
Cố định mơ
Cắt lọc Xử lý mơ Vùi mơ
Cắt mỏng Nhuộm H&E
Bảng 2.1: Quy trình xử lý mơ tựđộng:
Giai đoạn Dung dịch Thời gian
Định hình mơ Formol 10% 4 giờ Khử nước Cồn 70% 1 giờ Khử nước Cồn 80% 1 giờ Khử nước Cồn 90% 1 giờ Khử nước Cồn 100% 1 giờ Khử nước Cồn 100% 1 giờ Làm sáng mơ Xy len 1 giờ Làm sáng mơ Xylen 1 giờ Làm sáng mơ Xylen 1 giờ
Thấm paraffin Paraffin tan chảy 60-65oC 1 giờ
Thấm paraffin Paraffin tan chảy 60-65oC 1 giờ