5. Định tính nhóm đường và acid amin [4]
2.2.2.7. Phương pháp thử độc tính bán trường diễn [34]
- Động vật thí nghiệm: Thỏ trưởng thành, cả thỏ đực và thỏ cái, trọng lượng từ 1,8 – 2,2 kg, là những thỏ khoẻ mạnh, đạt tiêu chuẩn thí nghiệm
- Mẫu thử: Cao bán thành phẩm chiết xuất từ bài thuốc chữa viêm đa khớp - Các bộ kít định lượng GOT (ASAT), GPT (ALAT), Ure, Creatinin, Protein toàn phần, Bilirubin toàn phần do hãng Human cung cấp
- Các bộ kít định lượng Hồng cầu, Bạch cầu, Hemoglobin, do hãng Sysmex cung cấp.
- Máy định lượng sinh hoá bán tự động Scout – Italia. - Máy phân tích máu tự động Sysmex KX 21 – Mỹ.
+ Phương pháp nghiên cứu:
Sử dụng 2 lô thỏ thí nghiệm: - 1 lơ đối chứng sinh lý
- 1 lô thử, uống cao chiết từ bài thuốc chữa thấp khớp với liều gấp 10 lần liều dự định sử dụng trên lâm sàng (tương đương 20g dược liệu/kg thể trọng thỏ/ ngày x 30 ngày)
Mỗi ngày cho thỏ các lô thử thuốc uống thuốc và thỏ lô chứng uống nước đã đun sôi để nguội 1 lần, kéo dài 30 ngày liên tiếp.
Các chỉ số theo dõi: Theo dõi chức năng gan:
+ Định lượng GOT (ASAT) và GPT (ALAT) trong máu theo phương pháp Reitman – Frankel dùng cơ chất L- Aspartat và L - Alanine
+ Định lượng protein toàn phần trong máu bằng phương pháp Biuret + Định lượng bilirubin trong máu bằng phương pháp so màu.
Theo dõi chức năng thận:
+ Định lượng creatinin trong máu bằng phương pháp Jaffe.
+ Định lượng ure trong máu bằng phương pháp Rappoport dùng men urease.
Theo dõi chức năng tạo máu:
+ Đếm số lượng hồng cầu, bạch cầu, huyết sắc tố trên máy phân tích máu tự động.
+ Cắt và đọc tiêu bản gan, thận sau khi dùng thuốc 30 ngày và sau khi ngừng dùng thuốc 15 ngày.
+ Đơn vị thực hiện: Bộ môn giải phẫu bệnh - Trường Đại học Y Hà Nội
Đánh giá kết quả thí nghiệm:
So sánh sự thay đổi của các chỉ số sinh hoá và huyết học của thỏ trước khi dùng thuốc với sau khi dùng thuốc 15 ngày, 30 ngày và sau khi ngừng dùng thuốc 15 ngày. Đồng thời so sánh các chỉ số trên của lô thử thuốc với lô đối chứng cùng thời điểm xét nghiệm.
+ Mô tả thí nghiệm:
Thỏ mới mua về được ni tại nhà chăn ni ít nhất 1 tuần trước khi thí nghiệm để thỏ thích nghi với điều kiện sống mới, đồng thời để loại bỏ những thỏ yếu không đạt tiêu chuẩn thí nghiệm.
Chia thỏ ngẫu nhiên làm 2 lô: 1 lô chứng và 1 lô thử thuốc. Lấy máu thỏ để xác định các chỉ số sinh hoá và huyết học theo định kỳ, lấy máu theo đường tĩnh mạch tai vào các thời điểm sau:
- Lấy máu thỏ thí nghiệm lần 1: Phân tích máu để có các chỉ số sinh hố và huyết học bình thường của thỏ trước khi thí nghiệm
- Lấy máu thỏ thí nghiệm lần 2: Phân tích máu để có các chỉ số sinh hố và huyết học sau khi uống thuốc 15 ngày
- Lấy máu thỏ thí nghiệm lần 3: Phân tích máu để có các chỉ số sinh hoá và huyết học sau khi uống thuốc 30 ngày.
Sau 30 ngày uống thuốc: Lấy ngẫu nhiên mỗi lô 2 thỏ để làm xét nghiệm mô học của gan và thận
- Lấy máu thỏ thí nghiệm lần 4: Phân tích máu để có các chỉ số sinh hoá và huyết học sau khi ngừng uống 15 ngày.
Trước khi huỷ thỏ, kết thúc thí nghiệm, lấy ngẫu nhiên mỗi lô 2 thỏ để làm xét nghiệm mô học của gan thận
Cắt và đọc vi phẫu tổ chức gan và thận: Do Bộ môn Giải phẫu bệnh - Trường Đại
học Y - Hà Nội thực hiện.