3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1.2. Phân tích thành phần hoá học của bài thuốc bằng sắc ký lớp mỏng
Mẫu phân tích:
- “Cao chữa thấp khớp” Hồ Bình: Lấy 2g cao, chiết cao bằng 10ml methanol, cô dịch chiết methanol đến cắn. Hoà cắn thu được trong 2ml methanol được dung dịch chấm sắc ký (mẫu 1). Chiết cao theo cách tưong tự bằng hỗn hợp methanol - nước (4:1) thu được mẫu 2.
- Cao nước bài thuốc: Tiến hành lấy từng vị thuốc trong bài thuốc theo đúng tỷ lệ khối lượng như trong đơn, trộn đều và xay thành bột mịn. Chiết bài thuốc bằng
nước ở nhiệt độ sôi 2 lần, mỗi lần 1 giờ. Gộp dịch chiết, cô đến cắn thu được cao
nước bài thuốc. Chiết cắn bằng methanol và hỗn hợp methanol - nước (4:1) như trên thu được mẫu 3 và mẫu 4.
Kết quả phân tích định tính flavonoid: xem hình 3.1 A, B, C, E Kết quả phân tích định tính coumarin: xem hình 3.1 A, B, C, D,E
Hình 3.1. Sắc ký đồ định tính nhóm flavonoid và coumarin trong cao chiết bài thuốc Ghi chú: Hình 3.1.A, B, C, D, E: Hệ dung mơi: EtOAc – Acid acetic – Acid formic – nước (10:1:1:2)
A: chưa phun thuốc thử, soi UV 254nm B: chưa phun thuốc thử, soi UV 366nm
C: phun TT Natural product và soi UV 366nm D: TT KOH 5%/ EtOH và soi UV 366nm E: TT Fast salt B
Kết quả phân tích định tính terpenoid: xem hình 3.2 A, B, C, D và hình 3.3 A, B, C
Hình 3.2. Sắc ký đồ định tính terpenoid trong cao chiết bài thuốc
Ghi chú: Hình 3.2.A, B: Hệ dung mơi: Toluen – EtOAc (95:5) A: chưa phun thuốc thử, soi UV 254nm
B: TT Anisaldehyde
Hình 3.2.C, D: Hệ dung môi Cloroform – MeOH – nước (65 :35 :10) C: chưa phun thuốc thử, soi UV 254nm
D: TT Anisaldehyde
Ghi chú: Hình 3.3.A, B, C: Hệ dung môi n-butanol – EtOH – amoniac – nước (7:2:3:2)
A: chưa phun thuốc thử, soi UV 254nm B: TT Vanilin/acid phosphoric
C: TT α-naphtol
Kết quả phân tích định tính acid amin: xem hình 3.4 A Kết quả phân tích định tính đường: xem hình 3.4 B
Ghi chú: Hình 3.4.A: Hệ dung mơi n-propanol – EtOAc – acid acetic – nước (4:3:1:2) Thuốc thử: TT Ninhydrin
Hình 3.4.B: Hệ dung mơi n-butanol- acid acetic- nước (4:1:5) Thuốc thử: α-naphtol/ acid sulfuric
Nhận xét: Kết quả định tính bằng SKLM cho thấy bài thuốc chứa nhiều các hợp chất phenol (trong đó có flavonoid và coumarin), các hợp chất terpenoid, đường khử, acid amin. Các chất thuộc nhóm flavonoid, coumarin, terpenoid có trong bài thuốc cho kết quả tách rõ rệt nhất khi triển khai sắc ký bằng các hệ dung môi của glycosid với rất nhiều vết chất trên sắc ký đồ.