- Mẫu 9.1: tác dụng ức chế viêm ở mức độ trung bình (ức chế 55,63%).
3. Định tính: Qua kết quả khảo sát định tính phát hiện “vân tay” dược liệu trong chế
phẩm đã xác định được dấu vân tay của 4 dược liệu : Hy thiêm, sâm đại hành, câu đằng, thổ phục linh. Các phương pháp định tính xác định vân tay của các dược liệu được xây dựng như sau:
Định tính hy thiêm: Phương pháp sắc ký lớp mỏng (DĐVN IV, phụ lục 5.4)
Dụng cụ, thuốc thử:
- Bản mỏng silicagel G, tráng sẵn của Merck, được hoạt hóa ở 1050C trong 1 giờ.
- Ethyl acetat, methanol, ethanol tuyết đối (TT).
- Dung môi triển khai sắc ký: Cloroform – methanol – amoniac (7,5: 2,5: 0,5) - Hiện màu: Dung dịch acid sulfuric 10% trong ethanol
Cách tiến hành:
- Dung dịch thử: Lấy 2g cao hoà trong 30ml nước, chiết bằng cách lắc với
40ml ethylacetat. Để lắng, gạn lấy dịch chiết ethylacetat, cơ trên cách thủy đến cạn. Hịa cắn thu được trong 2ml ethanol tuyệt đối được dung dịch chấm sắc ký.
-Dung dịch đối chiếu: Lấy 1,3g bột hy thiêm, chiết hồi lưu trên cách thủy với
30ml hỗn hợp ethanol - nước (1:1) trong 1 giờ, lọc. Cơ dịch lọc trên cách thủy đến
cạn. Hịa cắn thu được trong 30ml nước rồi chuyển vào bình gạn, lắc với 40ml ethylacetat. Gạn lấy dịch chiết ethylacetat, cơ trên cách thủy đến cạn. Hịa cắn thu được trong 2ml ethanol tuyệt đối được dung dịch chấm sắc ký.
Chấm riêng biệt lên bản mỏng 10 µl mỗi dung dịch thử và dung dịch đối chiếu. Triển khai sắc ký cho đến khi dung môi đi được khoảng 10-13cm, lấy bản mỏng ra, để khô ở nhiệt độ phòng rồi phun thuốc thử hiện màu, sấy bản mỏng ở 1200C cho đến khi hiện vết rõ.
Kết quả : Sắc ký đồ của dung dịch thử phải có các vết cùng màu, cùng Rf với các vết thu được trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu.
Định tính sâm đại hành: Phương pháp sắc ký lớp mỏng (DĐVN IV, phụ lục 5.4)
Dụng cụ, thuốc thử:
- Bản mỏng silicagel G, tráng sẵn của Merck, được hoạt hóa ở 1000C trong 30 phút.
- Ethyl acetat, methanol, ethanol tuyết đối (TT).
- Dung môi triển khai sắc ký: Toluen - ethylacetat (7: 3) - Đèn tử ngoại, bước sóng 254nm và 366nm
Cách tiến hành:
- Dung dịch thử: Dùng dung dịch thử ở phần định tính hy thiêm.
-Dung dịch đối chiếu: Lấy 6,5g bột sâm đại hành, chiết hồi lưu trên cách thủy
với 30ml hỗn hợp ethanol - nước (1:1) trong 1 giờ, lọc. Cô dịch lọc trên cách thủy đến cạn. Hòa cắn thu được trong 30ml nước rồi chuyển vào bình gạn, lắc với 40ml ethylacetat. Gạn lấy dịch chiết ethylacetat, cô trên cách thủy đến cạn. Hòa cắn thu được trong 2ml ethanol tuyệt đối được dung dịch chấm sắc ký.
Chấm riêng biệt lên bản mỏng 10 µl mỗi dung dịch thử và dung dịch đối chiếu. Triển khai sắc ký cho đến khi dung môi đi được khoảng 12-13cm, lấy bản mỏng ra, để khơ ở nhiệt độ phịng, soi dưới đèn tử ngoại, bước sóng 254nm hoặc 366nm.
Kết quả : Sắc ký đồ của dung dịch thử phải có các vết phát quang cùng màu, cùng Rf với các vết thu được trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu.
Định tính câu đằng: Phương pháp sắc ký lớp mỏng (DĐVN IV, phụ lục 5.4)
Dụng cụ, thuốc thử:
- Bản mỏng silicagel G, tráng sẵn của Merck, được hoạt hóa ở 1000C trong 30 phút.
- Ethyl acetat, methanol, ethanol tuyết đối (TT).
- Dung môi triển khai sắc ký: Cloroform – methanol – amoniac (7,5: 2,5: 0,5) - Đèn tử ngoại, bước sóng 366nm
Cách tiến hành:
- Dung dịch thử: Dùng dung dịch thử ở phần định tính hy thiêm.
- Dung dịch đối chiếu: Lấy 2g bột câu đằng, chiết hồi lưu trên cách thủy với
30ml hỗn hợp ethanol - nước (1:1) trong 1 giờ, lọc. Cô dịch lọc trên cách thủy đến
cạn. Hòa cắn thu được trong 30ml nước rồi chuyển vào bình gạn, lắc với 40ml ethylacetat. Gạn lấy dịch chiết ethylacetat, cô trên cách thủy đến cạn. Hòa cắn thu được trong 2ml ethanol tuyệt đối được dung dịch chấm sắc ký.
Chấm riêng biệt lên bản mỏng 10 µl mỗi dung dịch thử và dung dịch đối chiếu. Triển khai sắc ký cho đến khi dung môi đi được khoảng 12-13cm, lấy bản mỏng ra, để khơ ở nhiệt độ phịng, soi dưới đèn tử ngoại, bước sóng 366nm.
Kết quả : Sắc ký đồ của dung dịch thử phải có các vết phát quang cùng màu, cùng Rf với các vết thu được trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu.
Định tính thổ phục linh:
Dụng cụ, thuốc thử:
- Bản mỏng silicagel G, tráng sẵn của Merck, được hoạt hóa ở 1000C trong 30 phút.
- Ethyl acetat, ethanol tuyết đối (TT).
- Dung môi triển khai sắc ký: Ethyl acetat – acid oxalic 10% (3:1), lấy lớp trên. - Hiện màu: Hơi amoniac.
Cách tiến hành:
- Dung dịch thử: Lấy 2g cao hoà trong 30ml nước, chiết bằng cách lắc với 40ml ethylacetat. Để lắng, gạn lấy dịch chiết ethylacetat, cô trên cách thủy đến cạn. Hòa cắn thu được trong 1ml ethanol tuyệt đối được dung dịch chấm sắc ký.
- Dung dịch đối chiếu: Lấy 1,4g thổ phục linh đã tán nhỏ, thêm 100ml nước, đun sôi nhẹ 1 giờ, để nguội, lọc. Chuyển dịch lọc vào bình gạn, lắc với 40ml
ethylacetat. Gạn lấy dịch chiết ethylacetat, cô trên cách thủy đến cạn. Hòa cắn thu được trong 1ml ethanol tuyệt đối được dung dịch chấm sắc ký.
Chấm riêng biệt lên bản mỏng 20 µl mỗi dung dịch thử và dung dịch đối chiếu. Triển khai sắc ký cho đến khi dung môi đi được khoảng 12-13cm, lấy bản mỏng ra, để khơ ở nhiệt độ phịng rồi đặt bản mỏng vào bình kín đã bão hịa hơi amoniac cho đến khi hiện rõ vết.
Kết quả : Sắc ký đồ của dung dịch thử phải có các vết phát quang cùng màu, cùng Rf với các vết thu được trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu.