3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.2. Nghiên cứu cải tiến phương pháp chiết xuất bài thuốc
Các tiêu chí của việc nghiên cứu cải tiến phương pháp chiết xuất:
- Quy trình chiết xuất đơn giản, dùng dung mơi rẻ, ít độc, dễ áp dụng để sản xuất
lớn.
- Giảm khối lượng thuốc phải uống, đạt yêu cầu cho nghiên cứu dạng bào chế mới mà vẫn giữ được công dụng của bài thuốc.
3.2.1.Thiết kế nghiên cứu
Để đạt được các tiêu chí nêu trên, chúng tơi tiến hành nghiên cứu cải tiến
phương pháp chiết xuất bán thành phẩm của bài thuốc dựa trên độ hịa tan của các nhóm hoạt chất có tác dụng chống viêm và giảm đau trong 2 dung môi cơ bản là cồn và nước và công năng của các vị thuốc trong bài thuốc.
Các phương án chiết xuất dự kiến và đã thử nghiệm: Phương án 1: Các vị thuốc là nguyên liệu khởi đầu:
Chia các vị thuốc theo nhóm “cơng dụng cơ bản” của bài thuốc chữa viêm đa khớp dạng thấp:
Nhóm 1: Các vị thuốc chính có tác dụng khu phong trừ thấp.
Nhóm 2: Các vị thuốc có tác dụng hỗ trợ điều trị phong thấp: bổ khí huyết, làm
mạnh gân xương, thanh nhiệt giải độc.
Các vị thuốc nhóm 1 được chiết xuất với nước như cao thấp khớp của Cty CP Y Dược học dân tộc Hồ Bình (1).
Các vị nhóm 2 chiết với nước sau đó loại các tạp chất để giảm khối lượng sử
dụng (2 ).
Tập hợp (1) và (2 ) thu được sản phẩm số 3.
Phương án 2: Cao thấp khớp là nguyên liệu khởi đầu:
Giảm khối lượng cao bằng cách loại các nhóm chất không cần thiết dùng cồn với các tỷ lệ khác nhau
- Cao chữa thấp khớp của Cty CP Y Dược học dân tộc Hồ Bình được hịa với
khuấy kỹ, để lắng tủa, lọc lấy dịch chiết cồn. Dịch lọc cô đến cao đặc thu được sản
phẩm 7.1. Phần tủa thu được cô cho bay hơi hết cồn thu được sản phẩm 7.2.
- Cao chữa thấp khớp được hòa nước thành cao lỏng 1:1 (tỷ lệ dược liệu/cao là
1:1). Thêm gấp 2 lần thể tích cồn 96%, khuấy kỹ, để lắng tủa, lọc lấy dịch chiết cồn. Dịch lọc cô đến cao đặc thu được sản phẩm 9.1. Phần tủa thu được cô cho bay hơi hết cồn thu được sản phẩm 9.2.
Phương án 3: Các vị thuốc là nguyên liệu khởi đầu:
Chiết dược liệu theo công thức bài thuốc (khơng có đường) bằng nước 3 lần, mỗi lần 2h ở 1000C. Gộp các dịch chiết, cô đến cao lỏng tỷ lệ dược liệu/cao là 1:1. Thêm cùng một thể tích cồn 96%, khuấy kỹ, để lắng tủa, lọc lấy dịch chiết cồn. Dịch lọc cô
đến cao đặc thu được sản phẩm 10.1. Phần tủa thu được cô cho bay hơi hết cồn thu
được sản phẩm 10.2.
Phương án 4: Chiết xuất các nhóm chất chính: nhóm flavonoid và nhóm glycosid để xác định nhóm hoạt chất dự kiến làm nhóm chất chỉ điểm cho tiêu chuẩn bán thành
phẩm và thuốc:
- Chiết phân đoạn ethyl acetat (tạm được coi là flavonoid toàn phần) của cao chữa thấp khớp: Cao chữa thấp khớp của Cty CP Y Dược học dân tộc Hồ Bình được
hịa với nước thành cao lỏng 1:1 (tỷ lệ dược liệu/cao là 1:1). Lắc với ether dầu đến khi dịch chiết ether dầu hết màu. Tiếp tục lắc vài lần (3 lần) với ethyl acetat đến khi dịch chiết ethyl acetat không màu. Gộp dịch chiết ethyl acetat, cô thu hồi dung môi dưới áp suất giảm đến cắn thu được sản phẩm 4.
- Chiết phân đoạn chất tủa trong hỗn hợp aceton – diethylether (4:1) (phân đoạn glycosid) của cao chữa thấp khớp:
Chiết cao chữa thấp khớp bằng methanol. Cơ dịch chiết methanol đến cịn cao
lỏng 10:1 (tỷ lệ dược liêu/cao là 10:1). Thêm gấp 10 lần thể tích hỗn hợp aceton – diethylether (4:1), khuấy kỹ, để lắng tủa trong tủ lạnh qua đêm. Gạn dịch trong thu lấy tủa là sản phẩm 5.
Các sản phẩm dự kiến có triển vọng có tác dụng giảm đau và chống viêm cấp được chọn để thử nghiệm sàng lọc so với cao thấp khớp và thuốc tham chiếu
Diclofenac. Liều thử mỗi sản phẩm tương đương với 20g dược liệu/kg thể trọng chuột . - Tác dụng chống viêm cấp được thực hiện trên mơ hình gây phù thực nghiệm
bằng carragenin ở chuột nhắt trắng.