lỏng và môi trường rắn của chủng nấm nghiên cứu
Trên môi trƣờng lỏng tĩnh: Chủng nấm sau khi được hoạt hóa trên môi
trường nhân giống cấp II được tiếp tục nuôi trên môi trường lỏng tĩnh. Thu sinh khối và phân tích hoạt chất sinh học. Phương pháp và các bước tiến hành được áp dụng theo Aphidech Sangdee và cộng sự [18], có cải tiến để phù hợp với điều kiện thí nghiệm.
+ Chuẩn bị 3 bình tam giác 500ml, mỗi bình chứa 200ml môi trường tương ứng với 3 công thức, mỗi công thức lặp lại 3 lần: LT1 (glucose 25g/l, peptone 10g/l, cao nấm men 5g/l, KH2PO4 1g/l, MgSO4.7H2O 0,5g/l), LT2 (glucose 60g/l, peptone 5g/l, KH2PO4 2g/l, MgSO4.7H2O 50g/l, amoni citrate 1,5g/l), LT3 (glucose 15g/l, peptone 2g/l, KH2PO4 2g/l, MgSO4.7H2O 1,5g/l, amoni citrate 1,5g/l, CaCl2 1g/l).
+ Bổ sung 10ml dung dịch đã được hoạt hóa trên môi trường nhân giống cấp 2 vào mỗi bình.
+ Nuôi lỏng tĩnh các công thức thí nghiệm ở nhiệt độ 250C – 280C, không chiếu sáng trong 45 ngày.
+ Tiến hành thu sinh khối và làm khô tại nhiệt độ 1050C trong 24 giờ. + Đánh giá khả năng tổng hợp Adenosin và Beauvericine bằng định lượng trên sắc ký lỏng cao áp (HPLC)
Trên môi trƣờng rắn: Sau khi được hoạt hóa, chủng giống được nhân
nuôi trên môi trường dinh dưỡng + gạo lứt + bột nhộng tằm trong bình thủy tinh với dung tích 500ml.
Thành phần môi trường dinh dưỡng gồm: DD1 (fructose 20g/l, peptone 5g/l, cao nấm men 5g/l, KH2PO4 1,5g/l, MgSO4.7H2O 0,5g/l), DD2 (glucose 20g/l, peptone 5g/l, cao nấm men 5g/l, KH2PO4 1,5g/l, MgSO4.7H2O 0,5g/l), DD3 (maltose 20g/l, peptone 5g/l, cao nấm men 5g/l, KH2PO4 1,5g/l, MgSO4.7H2O 0,5g/l).
Sau khi mẫu được cấy vào môi trường, đem nuôi ở nhiệt độ 250C trong tối, đến khi phủ kín thì chuyển sang chế độ chiếu sáng kích thích nảy mầm tạo thể quả. Thể quả được thu hoạch sau 45 ngày nuôi, được đông khô và được phân tích hoạt chất sinh học tại viện Hóa Sinh Biển, đơn vị tham gia nghiên cứu của đề tài.