Hóa chất và môi trường

Một phần của tài liệu (LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu tạo cây ngô chuyển gen dreb2 7 liên quan đến tính chịu hạn​ (Trang 27 - 28)

- Các bộ kit, enzyme, hóa chất sử dụng trong các thí nghiệm nhân dòng, nuôi cấy mô tế bào thực vật, chuyển gen, kiểm tra cây chuyển gen được cung cấp bởi các hãng uy tín như: Thermo Scientific (Mỹ), Merck (Đức), New England Biolabs (Mỹ),…

- Môi trường sử dụng trong nuôi cấy vi khuẩn và nuôi cấy mô thực vật được liệt kê trong Bảng 2.2.

Bảng 2.2. Thành phần các môi trường được sử dụng trong nghiên cứu

Môi trƣờng Thành phần

Môi trường nuôi cấy vi khuẩn

LB 5 g/L cao nấm men, 10 g/L tryptone, 10 g/L NaCl

YEP 5 g/L cao nấm men, 10 g/L peptone, 5 g/L NaCl, 25 mg/L rifampicin, 50 mg/L kanamycin

Môi trường nuôi cấy mô thực vật

Lây nhiễm lỏng MS + 2,4D 1,5mg/L + L-proline 0,7g/L + sucrose 68,4 g/L + glucose 36 g/L + AS (100uM). pH 5,5 Nuôi ủ - đồng nuôi cấy

MS + 2,4D 2mg/L + L-proline 0,7 g/L + sucrose 30 g/L + phytagel 2,4 g/L + AgNO3 0,85 mg/L + AS (100uM).

pH 5,8

Nuôi phục hồi

MS + 2,4D 2mg/L + L-proline 0,7 g/L + sucrose 30 g/L + MES 0,5 g/L + phytagel 2,4g/L + cefotaxim 100mg/L + vancomycin

100mg/L + AgNO3 0,85 mg/L pH 5,8

Chọn lọc 1 MS + 2,4D 1,5mg/L + L-proline 0,7 g/L + MES 0,5 g/L + sucrose 30 g/L + phytagel 2,4 g/L + cefotaxim 100mg/L + vancomycin 100mg/L + AgNO3 0,85 mg/L + hygromycin 1,5 mg/L.

Chọn lọc 2 MS + 2,4D 1,5mg/L + L-proline 0,7 g/L + MES 0,5 g/L + sucrose 30 g/L + phytagel 2,4 g/L + cefotaxim 100mg/L + vancomycin 100mg/L + AgNO3 0,85 mg/L + hygromycin 3 mg/L.

pH 5,8

Tái Sinh 1 MS + myo-inositol 100mg/L + sucrose 60 g/L + phytagel 2,4 g/L + cefotaxim 100mg/L + vancomycin 100mg/L + hygromycin 3 mg/L. pH 5,8

Tái Sinh 2 MS + myo-inositol 100mg/L + sucrose 30 g/L + casein 400mg/L + kinetin 1mg/L + nước dừa 150 mL/L + phytagel 2,4 g/L.

pH 5,8

Môi trƣờng ra rễ

MS + myo-inositol 100mg/L + sucrose 30 g/L + casein 100mg/l NAA 1mg/L + IBA 0.1 mg/L + phytagel 2,4 g/L.

pH 5,8

Một phần của tài liệu (LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu tạo cây ngô chuyển gen dreb2 7 liên quan đến tính chịu hạn​ (Trang 27 - 28)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(71 trang)