- Các bộ kit, enzyme, hóa chất sử dụng trong các thí nghiệm nhân dòng, nuôi cấy mô tế bào thực vật, chuyển gen, kiểm tra cây chuyển gen được cung cấp bởi các hãng uy tín như: Thermo Scientific (Mỹ), Merck (Đức), New England Biolabs (Mỹ),…
- Môi trường sử dụng trong nuôi cấy vi khuẩn và nuôi cấy mô thực vật được liệt kê trong Bảng 2.2.
Bảng 2.2. Thành phần các môi trường được sử dụng trong nghiên cứu
Môi trƣờng Thành phần
Môi trường nuôi cấy vi khuẩn
LB 5 g/L cao nấm men, 10 g/L tryptone, 10 g/L NaCl
YEP 5 g/L cao nấm men, 10 g/L peptone, 5 g/L NaCl, 25 mg/L rifampicin, 50 mg/L kanamycin
Môi trường nuôi cấy mô thực vật
Lây nhiễm lỏng MS + 2,4D 1,5mg/L + L-proline 0,7g/L + sucrose 68,4 g/L + glucose 36 g/L + AS (100uM). pH 5,5 Nuôi ủ - đồng nuôi cấy
MS + 2,4D 2mg/L + L-proline 0,7 g/L + sucrose 30 g/L + phytagel 2,4 g/L + AgNO3 0,85 mg/L + AS (100uM).
pH 5,8
Nuôi phục hồi
MS + 2,4D 2mg/L + L-proline 0,7 g/L + sucrose 30 g/L + MES 0,5 g/L + phytagel 2,4g/L + cefotaxim 100mg/L + vancomycin
100mg/L + AgNO3 0,85 mg/L pH 5,8
Chọn lọc 1 MS + 2,4D 1,5mg/L + L-proline 0,7 g/L + MES 0,5 g/L + sucrose 30 g/L + phytagel 2,4 g/L + cefotaxim 100mg/L + vancomycin 100mg/L + AgNO3 0,85 mg/L + hygromycin 1,5 mg/L.
Chọn lọc 2 MS + 2,4D 1,5mg/L + L-proline 0,7 g/L + MES 0,5 g/L + sucrose 30 g/L + phytagel 2,4 g/L + cefotaxim 100mg/L + vancomycin 100mg/L + AgNO3 0,85 mg/L + hygromycin 3 mg/L.
pH 5,8
Tái Sinh 1 MS + myo-inositol 100mg/L + sucrose 60 g/L + phytagel 2,4 g/L + cefotaxim 100mg/L + vancomycin 100mg/L + hygromycin 3 mg/L. pH 5,8
Tái Sinh 2 MS + myo-inositol 100mg/L + sucrose 30 g/L + casein 400mg/L + kinetin 1mg/L + nước dừa 150 mL/L + phytagel 2,4 g/L.
pH 5,8
Môi trƣờng ra rễ
MS + myo-inositol 100mg/L + sucrose 30 g/L + casein 100mg/l NAA 1mg/L + IBA 0.1 mg/L + phytagel 2,4 g/L.
pH 5,8