+ Bước 1: Ức chế sự phân bào
Sau khi nuơi cấy 37oC, đến giờ thứ 70 sau nuơi cấy, nhỏ vào ống mơi trường cấy máu 100µ l Demecolchine 10µ g/ml, ủ 10 phút ở 37oC. Demecolchin làm đứt thoi vơ sắc, ức chế phân bào ở giai đoạn trung kỳ, ở giai đoạn này, các nhà nghiên cứu thấy rằng nhiễm sắc thể cĩ kích thước lớn và hình dạng rõ nhất.
+ Bước 2: Nhược trương tế bào
Chuyển tồn bộ dịch nuơi cấy sau khi ủ với colchicine vào ống ly tâm 15ml, ly tâm 1500 vịng/phút, bỏ dịch nổi thu cặn, cho 6ml dung dịch nhược trương KCl 0,075M, sốc nhược trương bằng máy vortex. Ủ trong bồn cách thủy 37oC 20 phút. Ly tâm 1500 vịng/phút, bỏ dịch nổi thu cặn.
+ Bước 3 : Làm sạch cặn thừa trong dung dịch
Cho 6ml Acid acetic 5% vào ống ly tâm, lắc kỹ, ly tâm 1500 vịng/phút, bỏ dịch nổi thu cặn.
+ Bước 4 : Cố định nhiễm sắc thể
Để giữ hình dạng nhiễm sắc thể ở trung kỳ cần định hình bằng dung dịch Carnoy. Bước định hình đầu tiên, dùng 6ml dung dịch Carnoy vào mỗi ly tâm nhọn đáy, lắc nhẹ, để 15 phút ở nhiệt độ phịng, ly tâm trong 1500vịng/phút trong 10 phút, hút bỏ phần ở trên.
Bước định hình tiếp theo bằng dung dịch Carnoy , cho vào mỗi ống ly tâm nhọn đáy 6ml, lắc nhẹ, ly tâm 1500vịng /phút trong 10 phút, hút bỏ phần trên, lấy dịch ở đáy ống ly tâm.
Làm trong dung dịch tế bào bằng Carnoy, cho vào mỗi ống ly tâm 6ml, lắc nhẹ, ly tâm1500vịng /phút trong 10 phút, hút bỏ phần trên, lấy dịch ở đáy ống ly tâm làm tiêu bản. Nếu khơng làm tiêu bản thì cho 5ml Carnoy vào, lưu trữở -20oC.
+ Bước 5 : Làm tiêu bản
Sử dụng lame kính sạch, ngâm lame kính trong cồn tuyệt đối ở nhiệt độ 4oC cho đến khi nhỏ tiêu bản. Dùng pipet thủy tinh lấy dung dịch căn và kéo lên lame kính sao cho hỗn dịch lan theo mặt lame và tan đều trên mặt lame. Khi đĩ các nhiễm sắc thể hiện diện trên lame kính thành từng cụm.
2.2.6 Quy trình nhuộm band G (sử sụng Trypsine và Giemsa) 2.2.6.1 Nguyên tắc: