Mơi trường sử dụng để nuơi cấy là RPMI 1640 được bổ sung các thành phần sau: FBS (Huyết thanh phơi bị), PHA (Phytohemagglutinine), Antibiotic(kháng sinh) và Heparin sodium 25000UI. Các thành phần được trộn đều và phân mơi trường vào các ống nghiệm (5ml/ống nghiệm). Việc chuẩn bị mơi trường đều thực hiện trong điều kiện vơ trùng. Bảo quản mơi trường ở -20oC, rã đơng và ủ trong bể điều nhiệt 37oC 30 phút trước khi thực hiện quy trình cấy.
RPMI 1640 100ml
FBS 20ml
PHA 2,5ml 5ml/ống nghiệm Antibiotic- Antimycotic 2ml
RPMI 1640 được phát triển bởi Moore và các cộng sự tại viện Roswell Park Memorial, nên được viết tắt là RPMI (Roswell Park Memorial Institute). RPMI 1640 được cải tiến nhiều dự trên RPMI 1630 cĩ thay đổi một số acid amin và vitamin. RPMI 1640 đã được chứng minh hổ trợ tăng trưởng của nhiều loại tế bào trong nuơi cấy, đặc biệt là tế bào lympho người với sự bổ sung của Phytohemagglutinine (PHA) [8].
Huyết thanh phơi bị (FBS – Fetal Bovine Serum) là phần cịn lại trong huyết tương sau khi đơng tụ máu, trong quá trình protein huyết tương fibrinogen được chuyển đổi thành fibrin và vẫn cịn lại sau khi đơng máu. Huyết thanh phơi bị được sử dụng phổ biến nhất trong nuơi cấy tế bào in vitro các tế bào cĩ nhân điển hình. Bởi vì huyết thanh phơi bị cĩ một nồng độ thấp của các kháng thể và cĩ chứa yếu tố tăng trưởng [8].
Phytohemagglutinine (PHA) là một loại lectin được tìm thấy ở thực vật, đặc biệt là cây họ đậu. Nĩ được tìm thấy ở nồng độ cao nhất trong đậu chưa chín màu đỏ và đậu trắng và nĩ cũng được tìm thấy ở nồng độ thấp hơn ở các loại đậu xanh và đậu thơng thường khác (Phaseolus Vulgaris). Lectin cĩ một số hiệu ứng chuyển hĩa tế bào, nĩ gây ra sự gián phân và ảnh hưởng đến các màng tế bào liên quan đến vận chuyển và tính thấm với protein. Trong y học PHA được sử dụng như một nhân tố kích hoạt phân chia tế bào ở tế bào lympho [8].
Kháng sinh và kháng nấm (Antibiotic – Antimycotic) được bổ sung vào mơi trường mục đích hạn chế ngoại nhiểm của vi sinh và vi nấm vào mơi trường nuơi cấy. Thơng thường được sử dụng là Penicillin (10,000 UI/ml) và Streptomycin (10mg/ml).
Heparin sodium cĩ tác dụng chống máu đơng trong và ngồi cơ thề trơng qua tác dụng lên antithrombin III. Bổ sung thêm Heparin vào mơi trường để tác dụng chống máu tồn phần tạo các cục máu đơng.